[发明专利]一种检测内质网极性的荧光探针及其制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种检测细胞内质网极性的荧光探针：。该探针能准确的定位于内质网，具有较高的灵敏度，良好的光学稳定性以及对极性特异性响应，实现了对细胞内内质网极性的检测。同时，本发明提供了该探针的合成方法，步骤简单、纯化方便、收率高。在检测细胞和生物体内质网生理作用方面具有应用前景。

技术领域

本发明属于分析化学技术领域，具体涉及一种检测内质网极性的双光子荧光探针及其应用。

背景技术

极性作为影响生物体微环境变化的重要参数，在化学和化学生物学中起着至关重要的作用。目前，荧光成像技术由于其高灵敏度、无创检测和高选择性，已成为检测生物微极性环境的有力工具。极性决定了大量蛋白质和酶之间的相互作用的活性，反映了膜室的渗透性，细胞内极性反映了生物系统中许多复杂的生理和病理过程。许多细胞事件，如脂肪细胞分化，免疫反应激活，细胞迁移和死亡，以及分子跨细胞层的运输等都与细胞的极性变化有关。

内质网是细胞内除核酸以外的一系列重要的生物大分子，如蛋白质、脂类(如甘油三酯) 和糖类合成的基地。滑面内质网还具有解毒功能，如肝细胞中的滑面内质网中含有一些酶，用以清除脂溶性的废物和代谢产生的有害物质。而极性则是影响着内质网功能的正常运作的一个重要因素，内质网极性的异常会带来许多疾病。因此研究内质网极性对于人类的健康发展具有重要的意义。

荧光成像分析法具有灵敏度高、选择性好、响应迅速、操作简单等优点，而且检测条件对细胞基本没有损伤，已经广泛用于各种生物小分子的检测。目前，用于检测细胞内内质网的探针也得到了迅速发展，其中一些已经商品化。但是，目前已有报道的内质网极性探针毒性较大而且只能用于细胞试验，而不能用于生物体，这极大限制了其在内质网生理功能上的应用。

发明内容

针对现有技术中的问题，本发明提供一种检测内质网极性的双光子荧光探针，响应速度快、抗干扰能力强，毒性低。

本发明的另一目的是提供一种上述荧光探针在检测细胞或生物体细胞内质网极性的应用。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案。

一种检测细胞内内质网极性的荧光探针，化学名称为4-二苯基氨基-9-（4-甲苯磺酰氨基）乙基-1,8-萘酰胺，简称为ER-P，其化学结构式如式（I）所示：

式（I）。

上述荧光探针的制备方法，包括以下步骤：

（1）4-溴-1,8-萘二甲酸酐与Boc-乙二胺于乙醇中加热反应，分离纯化得到4-溴-9-Boc-氨基乙基-1,8-萘酰胺：

；

（2）4-溴-9-Boc-氨基乙基-1,8-萘酰胺与三氟乙酸于二氯甲烷中反应，分离纯化得4-溴-9-氨乙基-1,8-萘酰胺：

；

（3）4-溴-9-氨乙基-1,8-萘酰胺与4-甲基苯磺酰氯于二氯甲烷中反应，分离纯化得4-溴-9-（4-甲基苯磺酰氨基）乙基-1,8-萘酰胺：

；

（4）4-溴-9-（4-甲基苯磺酰氨基）乙基-1,8-萘酰胺与4-（二苯基氨基）苯甲醛在碳酸钾和四（三苯基膦）钯存在下于四氢呋喃中加热回流，分离纯化得4-二苯基氨基-9-（4-甲基苯磺酰氨基）乙基-1,8-萘酰胺，即为荧光探针ER-P：

步骤（1）中，所述4-溴-1,8-萘二甲酸酐与Boc-乙二胺的摩尔比为2:1。

步骤（1）中，分离纯化步骤为：将反应后体系直接抽滤，可得纯净物。

步骤（1）中，所述反应温度为80 ℃，反应时间为12 h；