[发明专利]靶向识别恩诺沙星单链抗体的核心氨基酸序列及应用

说明书

本发明涉及一种靶向识别恩诺沙星单链抗体的核心氨基酸序列及应用，属于抗菌药物抗原检测领域。本发明借助于分子对接及虚拟筛选技术，在恩诺沙星单链抗体晶体结构的基础上，通过分子对接技术，搜寻虚拟多肽库中与靶标蛋白结合模式与亲和力最佳的多肽配体。其多肽序列为DYYGNNYLDYYGL和FMYAFLGE。通过ELISA结合试验结果表明，恩诺沙星单链抗体能够与相应靶标抗原有良好的结合能力，借助本发明设计而成的多肽，可用于对恩诺沙星抗原进行定量和定性的快速检测。

技术领域

本发明涉及一种靶向识别恩诺沙星单链抗体的核心氨基酸序列及应用，属于抗菌药物抗原检测领域。

背景技术

利用噬菌体展示技术筛选氟喹诺酮类抗菌药物的特异性单链抗体，不依赖细胞融合和动物免疫就可以得到抗体，表达纯化后ELISA鉴定抑制效果，试验周期短。通过与Internet上的NCBI DNA数据库相联，用SWISS-MODEL软件对scFv基因序列进行同源建模，分析其结构。

基于分子对接的虚拟筛选技术是一种新兴的研究多肽与蛋白质之间相互作用的技术手段。这一技术主要是运用计算机快速运算实现多肽与相应靶标蛋白在空间构象上的对接，将虚拟多肽数据库中的分子逐一与靶标蛋白晶体结构的特定活性位点进行对接，通过计算机快速运算并不断调整多肽与靶标蛋白结合的位置、构象、分子内部可旋转键的二面角和靶标蛋白的氨基酸残基侧链和骨架，寻找多肽分子与靶标蛋白在空间结构上的最佳构象，并预测两者之间的结合模式与亲和力，通过评分值挑选出接近天然构象的与靶标蛋白亲和力最佳的多肽配体的一种理论模拟分子间相互作用的方法。

恩诺沙星是一类化学合成的第三代喹诺酮类抗菌药，是小分子化合物，属于半抗原，将其与蛋白质载体进行偶联后，再制备成完全抗原，即指小分子物质必须和载体蛋白偶联之后方能刺激机体产生特异性的抗体，并包被于固相载体上用于ELISA检测。该药物具有抗菌谱广、抗菌力强、作用迅速、吸收完全、毒作用小和不易产生耐药等特点；随着恩诺沙星的广泛应用，在动物源性食品中的残留将对人类身体健康产生非常大的危害，已引起广泛关注,有必要进一步对其加强监测。

发明内容

本发明借助于分子对接及虚拟筛选技术，在恩诺沙星单链抗体晶体结构的基础上，通过分子对接技术，搜寻虚拟多肽库中与靶标蛋白结合模式与亲和力最佳的多肽配体。通过ELISA结合试验结果表明，恩诺沙星单链抗体能够与相应靶标抗原有良好的结合能力，由此证明，借助本发明设计而成的多肽，可用于对恩诺沙星抗原进行定量和定性的快速检测。

为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：

靶向识别恩诺沙星单链抗体的核心氨基酸序列为SEQ ID NO.1：DYYGNNYLDYYGL和SEQ ID NO.2：FMYAFLGE。

所述的靶向识别恩诺沙星单链抗体的核心氨基酸序列，包括以所述的多肽序列为核心，任何对该多肽序列所进行的相应调整或修饰；修饰材料包括但不限制于纳米材料、荧光材料、酶类、生物素及特定的蛋白质。

所述的靶向识别恩诺沙星单链抗体的核心氨基酸序列在恩诺沙星抗原的鉴定中的应用。

所述的序列在恩诺沙星抗原的快速检测中的应用。

所述快速检测包括但不局限于酶联免疫吸附试验(ELISA)检测。

所述的序列在对恩诺沙星抗原进行定量和定性检测中的应用。

本发明的有益效果：

1、本发明借助于分子对接及虚拟筛选技术，在恩诺沙星单链抗体结构的基础上，通过分子对接技术，搜寻虚拟多肽库中与靶标蛋白结合模式与亲和力最佳的多肽配体，最终得到特异性结合恩诺沙星抗原的多肽序列，其多肽序列为DYYGNNYLDYYGL(SEQ ID NO.1)和FMYAFLGE(SEQ ID NO.2)。经与恩诺沙星抗原进行亲和力鉴定，亲和力较好。