[发明专利]一种邻细胞间相互作用的研究方法

权利要求书

1.一种邻细胞间相互作用的研究方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)制备纳米粒子声敏剂；

(2)将制备得到的纳米粒子声敏剂与A类细胞进行孵育，使所述的A类细胞摄取该纳米粒子声敏剂；

(3)将吞噬了纳米粒子声敏剂的A类细胞与B类细胞混合，以培养基重悬后，在顺磁性环境下，制备顺磁性细胞悬液；

(4)在外加磁场作用下，将吞噬了纳米粒子声敏剂的A类细胞与B类细胞构建微组织3D细胞群，随后使用超声调控A类细胞内活性氧(ROS)水平，使A类细胞损伤；

(5)对A类细胞与B类细胞间的相互作用方式进行研究；

其中，A类细胞与B类细胞均是生物学中空间上相邻的细胞，所谓空间上相邻指3D结构中的相邻。

2.如权利要求1所述的邻细胞间相互作用的研究方法，其特征在于，所述的纳米粒子声敏剂为大黄素纳米混悬剂，是通过以下步骤制备得到：称取大黄素、聚乙烯吡咯烷酮与十二烷基硫酸钠于烧杯中，加入去离子水，高速均质；再采用高压均质机多次循环得大黄素纳米混悬剂，即纳米粒子声敏剂。

3.如权利要求2所述的邻细胞间相互作用的研究方法，其特征在于，所述的大黄素纳米混悬剂，是通过以下步骤制备得到：称取大黄素300mg、聚乙烯吡咯烷酮1.5g与十二烷基硫酸钠30mg于烧杯中，加入100ml去离子水，高速均质5次，每次20秒；再采用高压均质机700bar循环15次得到大黄素纳米混悬剂，即纳米粒子声敏剂。

4.如权利要求1所述的邻细胞间相互作用的研究方法，其特征在于，纳米粒子声敏剂通过以下步骤制备得到：

(1)金纳米颗粒制备：取氯金酸于三颈烧瓶中，加入超纯水，超声混匀，水浴锅中回流加热搅拌升温；搅拌条件下加入三水合柠檬酸钠溶液；继续回流加热搅拌；室温下搅拌冷却，得酒红色金纳米颗粒；

(2)姜黄素@金纳米粒的制备：称取姜黄素溶解于乙醇中，将金纳米颗粒分散在溶有姜黄素的乙醇溶液中，避光静置，取上清，得姜黄素@金纳米粒；

(3)糖修饰纳米化姜黄素的制备：称取蛋黄卵磷脂，胆固醇，糖-PEG600-DSPE，其中糖为甘露糖、葡萄糖或半乳糖，将蛋黄卵磷脂，胆固醇，糖-PEG600-DSPE溶于乙醇，混匀后旋干成膜，加入姜黄素@金纳米粒溶液分散脂膜，再次使用旋转蒸发仪旋干，加入生理盐水超声水化，探头超声后通过聚碳酸酯膜过滤，离心，取上清得糖修饰纳米化姜黄素，即纳米粒子声敏剂。

5.如权利要求4所述的邻细胞间相互作用的研究方法，其特征在于，所述的糖为葡萄糖或甘露糖

6.如权利要求4所述的邻细胞间相互作用的研究方法，其特征在于，黄卵磷脂，胆固醇，糖-PEG600-DSPE的摩尔比为49：50：1；所述的超声水化是指超声处理运行10秒，暂停6秒，工作10次。

7.如权利要求1所述的邻细胞间相互作用的研究方法，其特征在于，纳米粒子声敏剂通过以下步骤制备得到：

原卟啉脂质体：将蛋黄磷脂酰胆碱(EPC)、胆固醇(CHO)和DSPE-PEG-2000用无水乙醇溶解在旋转蒸发瓶中，得到蛋黄磷脂酰胆碱(EPC)、胆固醇(CHO)和DSPE-PEG-2000的混合物，通过在减压条件下蒸发该混合物形成薄的脂质膜；用含有原卟啉的生理盐水溶液水化该脂质膜；通过超声处理使脂质体溶液分散，并通过聚碳酸酯膜挤出，便得到原卟啉脂质体，即纳米粒子声敏剂。

8.如权利要求7所述的邻细胞间相互作用的研究方法，其特征在于，蛋黄卵磷脂(EPC)，胆固醇(CHO)，DSPE-PEG-2000的摩尔比为49：50：1。

9.如权利要求1所述的邻细胞间相互作用的研究方法，其特征在于，所述的A类细胞包括但不限于胶质细胞、胶质瘤细胞、成纤维细胞、血管平滑肌细胞、内皮细胞、细菌以及真菌。