[发明专利]检测先天性肾性尿崩症AVPR2基因突变的引物、方法和试剂盒

权利要求书

1.检测先天性肾性尿崩症AVPR2基因突变的引物，其特征在于，包括扩增覆盖检测先天性肾性尿崩症AVPR2基因全外显子的正、反向引物和测序引物；其碱基序列为：

AVPR2-E1-F：TGGAGGCTATGGCAGTG

AVPR2-E1-R：GAGGGTGAAGGAGGTCTTTAG；

AVPR2-E2-F：GGGTGTGTATCCCTCATAACA

AVPR2-E2-R：GCAATCCAGGTGACATAGG；

AVPR2-E2-F：GCTCTTCATCTTCGCCC

AVPR2-E2-R：GCCCAGCACAGCACATA；

AVPR2-E2-3-F：GCCAAGACTGTGAGGATGA

AVPR2-E2-3-R：ACACGCTGCTGCTGAAA；

AVPR2-E3-F：ACCAGCCATCCTGAACC

AVPR2-E3-R：CTCCACACCCACCGTTA；

M13F：TGTAAAACGACGGCCAGT；

M13R：AACAGCTATGACCATG。

2.如权利要求1所述的引物，其特征在于，正、反向引物的使用浓度比为：1:1，序引物的使用浓度比为：M13F:M13R＝1:1。

3.一种检测先天性肾性尿崩症AVPR2基因突变的方法，其特征在于，其包括如下步骤：

(1)提取样品DNA；

(2)利用扩增引物对(1)中的DNA进行扩增，获得扩增产物，扩增引物序列如下：

AVPR2-E1-F：TGGAGGCTATGGCAGTG

AVPR2-E1-R：GAGGGTGAAGGAGGTCTTTAG；

AVPR2-E2-F：GGGTGTGTATCCCTCATAACA

AVPR2-E2-R：GCAATCCAGGTGACATAGG；

AVPR2-E2-F：GCTCTTCATCTTCGCCC

AVPR2-E2-R：GCCCAGCACAGCACATA；

AVPR2-E2-3-F：GCCAAGACTGTGAGGATGA

AVPR2-E2-3-R：ACACGCTGCTGCTGAAA；

AVPR2-E3-F：ACCAGCCATCCTGAACC

AVPR2-E3-R：CTCCACACCCACCGTTA；

(3)利用测序引物M13F与M13R对(2)中的扩增产物分别进行正向和反向测序，获得所述扩增产物的基因序列；测序引物序列如下：

M13F：TGTAAAACGACGGCCAGT；

M13R：AACAGCTATGACCATG；

(4)将(3)中的基因序列与野生AVPR2基因序列进行比较，确定AVPR2基因是否发生突变。

4.一种检测先天性肾性尿崩症AVPR2基因突变的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括样品DNA抽提试剂、无水乙醇、检测体系PCR反应液、测序体系反应液、阳性对照品、阴性对照品和空白对照品，其中检测体系PCR反应液包括五对扩增引物，测序体系反应液包括测序引物M13F与M13R，其碱基序列为：

AVPR2-E1-F：TGGAGGCTATGGCAGTG

AVPR2-E1-R：GAGGGTGAAGGAGGTCTTTAG；

AVPR2-E2-F：GGGTGTGTATCCCTCATAACA

AVPR2-E2-R：GCAATCCAGGTGACATAGG；

AVPR2-E2-F：GCTCTTCATCTTCGCCC

AVPR2-E2-R：GCCCAGCACAGCACATA；

AVPR2-E2-3-F：GCCAAGACTGTGAGGATGA

AVPR2-E2-3-R：ACACGCTGCTGCTGAAA；

AVPR2-E3-F：ACCAGCCATCCTGAACC

AVPR2-E3-R：CTCCACACCCACCGTTA；

M13F：TGTAAAACGACGGCCAGT；

M13R：AACAGCTATGACCATG。