[发明专利]检测DNMT3A基因突变的引物、试剂盒和方法在审
| 申请号： | 201910887854.9 | 申请日： | 2019-09-19 |
| 公开（公告）号： | CN110564827A | 公开（公告）日： | 2019-12-13 |
| 发明（设计）人： | 林筱剑 | 申请（专利权）人： | 合肥艾迪康医学检验实验室有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6858 | 分类号： | C12Q1/6858;C12N15/11 |
| 代理公司： | 33246 浙江千克知识产权代理有限公司 | 代理人： | 黎双华 |
| 地址： | 230088 安徽省合肥市高新*** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 引物 甲基转移酶 检测结果 快速检测 位点突变 相关基因 编码DNA 预后 可用 扩增 位点 突变 体内 参考 检测 治疗 | ||
1.检测DNMT3A基因突变的引物，其特征在于，DNMT3A基因突变位点是c.2645位点，所述引物包括：扩增DNMT3A的c.2645位点的扩增引物DNMT3A-F、DNMT3A-R和测序引物M13F、M13R，其碱基序列为：
DNMT3A-F:TGTAAAACGACGGCCAGTTTCGGCAGAACTAAGCAG
DNMT3A-R:AACAGCTATGACCATGGTCCCTTACACACACGCA
M13F：TGTAAAACGACGGCCAGT
M13R：AACAGCTATGACCATG。
2.检测DNMT3A基因c.2645位点突变的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)抽提外周血中的基因组DNA；
(2)利用扩增引物DNMT3A-F、DNMT3A-R对步骤(1)中提取的DNA进行扩增，获得扩增产物；
DNMT3A-F:TGTAAAACGACGGCCAGTTTCGGCAGAACTAAGCAG
DNMT3A-R:AACAGCTATGACCATGGTCCCTTACACACACGCA
(3)利用测序引物M13F、M13R对步骤(2)中的扩增产物进行测序；
M13F：TGTAAAACGACGGCCAGT
M13R：AACAGCTATGACCATG
(4)对测序结果进行判断，通过判读DNMT3A基因c.2645位点的测序图中是否有双峰来判断DNMT3A基因是否发生突变。
3.检测DNMT3A基因c.2645位点突变情况的试剂盒，所述试剂盒包括检测体系PCR扩增反应液、测序体系反应液，其特征在于，所述检测体系PCR扩增反应液包括一对扩增引物DNMT3A-F、DNMT3A-R，所述测序体系反应液包括一对测序引物M13F、M13R，其序列为：
DNMT3A-F:TGTAAAACGACGGCCAGTTTCGGCAGAACTAAGCAG
DNMT3A-R:AACAGCTATGACCATGGTCCCTTACACACACGCA
M13F：TGTAAAACGACGGCCAGT
M13R：AACAGCTATGACCATG。
4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述检测体系PCR扩增反应液还包括2×PCR Buffer、dNTPs和KOD FX DNA聚合酶。
5.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述测序体系反应液还包括EDTA、无水乙醇、75％乙醇、HIDI和Bigdye Terminator V3.1。
6.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述测序体系反应液还包括测序纯化液，所述测序纯化液包括核酸外切酶I和牛小肠碱性磷酸酶。
7.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括阳性对照品和阴性对照品。
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