[发明专利]可结合SFTSV的多肽、其核酸编码序列及应用

说明书

本发明涉及一种可结合SFTSV的多肽，包括3个互补决定区CDR1‑3，CDR1序列为或包括SEQ ID NO:1所示序列，CDR2序列为或包括SEQ ID NO:2所示序列，CDR3序列为或包括SEQ ID NO:3所示序列之一。本发明针对高致死率但缺乏有效疫苗和特异性抗病毒药物的SFTS进行纳米抗体药物开发和诊断试剂盒研发，通过制备GN蛋白、免疫双峰骆驼、利用噬菌体库展示纳米单抗的平台技术等，筛选到特异性结合GN的纳米抗体VHH，鉴定了其CDR序列，并构建了人源化抗体SNB；同时利用人源化小鼠模型体内评估SNB在治疗SFTSV感染的疗效。本发明为SFTS的临床治疗提供潜在的纳米抗体新药,同时为SFTS的诊断提供相应的检测试剂盒。

优先权申明

本申请要求本申请人于2019年7月23日提交的国际申请号为PCT/CN2019/097350的PCT申请的优先权，通过引用并入本文中。

技术领域

本发明涉及生物医药领域。更特别地，涉及一种可结合SFTSV的多肽，所述的多肽在制备SFTSV检测剂或SFTSV治疗药物中的应用。

背景技术

发热伴血小板减少综合征(Severe fever with thrombocytopenia syndrome,SFTS)是一种由新型布尼亚病毒(Severe fever with thrombocytopenia syndrome virus，SFTSV)引起的急性传染病，主要通过蜱虫叮咬或急性病人的血液、黏膜接触传播，临床主要表现为发热、血小板减少、白细胞减少以及包括胃肠道、肝脏、肾脏在内的多器官功能异常。自2009年首次在湖北和河南报道SFTS以来，我国已有16个省份发布了病例报告，截止2014年的确诊病例数已超过3500例，且近年来发病率不断升高；同时，在韩国、日本、阿拉伯和美国均有SFTS病例报道，提示该病的流行区域正在扩大。目前报道的SFTS死亡率在6.3％-30％之间；而韩国和日本在2016年公布的死亡率分别高达35.4％和50％。然而，临床至今缺乏针对SFTS的特异性治疗药物，只能进行广谱抗病毒治疗和对症下药，这为SFTS的预防及控制带来极大困难。

特异性中和抗体在抗病毒治疗方面有着很好的临床疗效，如呼吸道合胞病毒单抗Palivizumab和狂犬病毒抗血清等。已有研究指出，针对SFTSV表面糖蛋白(GlycoproteinN，GN)的中和抗体对病人生存率起着重要作用。而我们前期的研究结果也显示，血清含抗GN抗体的SFTS病人均康复良好，而血清中不含GN抗体的SFTS病人其死亡率高达66.7％。这些研究提示，靶向GN的中和抗体治疗将是对抗SFTSV行之有效的方法。

1993年，一种来源于骆驼科的新型天然抗体被发现。该抗体天然缺失轻链而只由重链组成，其重链包含两个恒定区(CH2和CH3)、一个铰链区和一个重链可变区(Variableheavy chain domain，VHH，即抗原结合位点)，该重链可变区的相对分子质量约为13KDa，仅为常规抗体的1/10，且分子高度和直径均在纳米级别，是目前可获得的最小的功能性抗体片段，因此又被称为纳米单抗(Nanobody，Nb)。因纳米单抗稳定性高(90℃条件下仍不会降解)、亲和力高、与人源抗体同源性超过80％、毒性和免疫原性均较低等特点，最近纳米单抗被广泛用于免疫诊断试剂盒研发、影像学研发以及针对肿瘤、炎症、传染病和神经系统疾病等领域的抗体药物研发。

目前已知抗GN的SFTS中和抗体是2013年通过噬菌体展示SFTS病人抗体库筛选得到的Mab4-5，其IC50为2μg/ml-44.2μg/ml。中和抗体的IC50越低越好，能极大节约抗体的使用量从而节省生产成本，同时也能延长抗体在体内维持有效浓度的时间。我们前期对SFTS病人血清的抗体效价做了检测，发现针对GN蛋白的抗血清仅为100左右的稀释倍数，这提示我们，以低抗体滴度的SFTS病人血清构建抗体库可能限制了高效中和抗体的筛选。因此我们期望通过新的技术手段，获得更为高效稳定的、IC50更低的SFTSV特异性中和抗体。

发明内容