[发明专利]重组犬PD-1融合蛋白及其制备方法与应用有效
| 申请号： | 201910888315.7 | 申请日： | 2019-09-19 |
| 公开（公告）号： | CN110590959B | 公开（公告）日： | 2021-01-05 |
| 发明（设计）人： | 罗昊澍;朱丽娜;师磊;于金库;韩国;熊剑胜 | 申请（专利权）人： | 北京伟杰信生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C07K19/00 | 分类号： | C07K19/00;C12N15/62;C12N15/85;C07K14/705;A61K38/17;A61P35/00 |
| 代理公司： | 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 | 代理人： | 黄爽 |
| 地址： | 100085 北京*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 重组 pd 融合 蛋白 及其 制备 方法 应用 | ||
1.重组犬PD-1融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白由犬PD-1蛋白胞外区或犬PD-1蛋白胞外区突变体直接或间接与Fc片段相连而成；
所述犬PD-1蛋白胞外区为：
(a)由SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列组成的蛋白质；
所述犬PD-1蛋白胞外区突变体为：
(c)由SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列组成的蛋白质；
其中所述Fc片段来源于犬。
2.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述Fc片段包含免疫球蛋白铰链区、CH2和CH3区。
3.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白由犬PD-1蛋白胞外区或犬PD-1蛋白胞外区突变体直接或间接与Fc片段之间通过Linker连接而成；所述Linker是由2-20个柔性氨基酸组成的柔性多肽，所述柔性氨基酸选自Gly、Ser、Ala、Thr中的至少一种。
4.根据权利要求3所述的融合蛋白，其特征在于，所述Linker为(Gly-Gly-Gly-Gly-Ser)n，其中n为2-5之间的整数。
5.根据权利要求4所述的融合蛋白，其特征在于，n为2。
6.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白为cPD1-Fc或cPD1mu-Fc；
融合蛋白cPD1-Fc为：
(e)由SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；
融合蛋白cPD1mu-Fc为：
(g)由SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列组成的蛋白质。
7.含有权利要求1-6任一项所述融合蛋白编码基因的生物材料，所述生物材料为表达盒、转座子、质粒载体、噬菌体载体、病毒载体或工程菌。
8.权利要求1-6任一项所述融合蛋白的制备方法，其特征在于，所述方法包括：人工合成所述融合蛋白的编码基因，并进行密码子优化，将优化后的基因构建到真核表达载体中，转入真核细胞，并在真核细胞中表达，分离纯化目标蛋白。
9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述真核表达载体为pcDNA3.1，所述真核细胞为CHO细胞。
10.权利要求1-6任一项所述融合蛋白在制备犬抗肿瘤药物或组合物中的应用，其中所述肿瘤为犬黑色素瘤、犬间质肉瘤、犬乳腺癌。
11.犬抗肿瘤药物或组合物，其特征在于，有效成分为权利要求1-6任一项所述融合蛋白。
12.犬PD-1蛋白突变体，其特征在于，所述突变体含有位于犬PD-1蛋白氨基酸序列第132位残基的T→L的突变位点，所述突变体由SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列组成。
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