[发明专利]脑缺血相关基因作为缺血性卒中行为学特征分析的生物标记的应用

说明书

本发明公开了一种用于辅助诊断缺血性卒中，或监测缺血性卒中治疗效果的制剂，制剂为用于扩增至少一种脑缺血相关基因P2RY12、NOS1、UCP2、MMP9和VWf的引物。本发明采用CatWalk系统，于建模后第7天，对MCAO小鼠模型进行步态分析，并从文献中搜集脑缺血相关基因，揭示了与脑缺血相关的基因表达与步态参数之间的显著相关性，该研究结果定量并可靠的评估了MCAO动物模型的运动行为，对于理解基因表达在缺血性卒中的早期发作和步态变异的长期影响时的功能作用具有重要的生物学意义，有助于研究脑缺血再灌注的疾病进展，并为缺血性中风的小鼠模型提供了新的治疗方向。

技术领域

本发明涉及生物医药领域，具体涉及脑缺血相关基因作为缺血性卒中行为学特征分析的生物标记的应用。

背景技术

脑中风是世界第三大最常见的导致死亡的疾病，它能引起长期的并发症，如II型糖尿病；脑中风每年的全球死亡率估计为470万。

脑中风患者在记忆能力、思考能力方面存在困难，并且出现部分瘫痪和运动能力受损。与中风相关的全脑或者局灶性脑缺血可导致死亡或永久性残疾。每年在美国发生的新的和复发的中风病例数超过70万例，而在中国，每年产生250万例新的脑中风患者，其中750万例脑中风的幸存者中有160万例死亡，这种情况给社会造成了严重的经济负担。

缺血性中风的复杂病理学包括生物能量衰竭、酸中毒、兴奋性毒性、神经细胞和胶质细胞的激活、由于免疫细胞的涌入和炎症反应而导致的血脑屏障(BBB)受损。目前，静脉注射重组组织纤溶酶激活剂(rt-PA)是美国食品和药物管理局批准的唯一一种用于急性缺血性卒中溶栓治疗的药物，可在血栓溶解开始和脑动脉闭塞后的组织再灌注后3个小时内将神经损伤降至最低，大脑中动脉(MCA)及其分支在人脑缺血时受到严重影响，70％的梗死发生在这里。现有技术模仿了人类缺血性中风来研究该疾病的病理生理学，并设计出有效的治疗策略，目前已有的研究技术中，大脑中动脉阻断(MCAO)是无需开颅，并能集中阻断颈外动脉，从而降低小鼠动物模型的脑血流速度的最常采用的方法之一，用该方法构建的动物模型被称为MCAO动物模型，MCAO动物模型以高重复性梗死为特征，它对于人类缺血性中风及其相关细胞死亡、炎症和对BBB的损害作用的复制和研究是必不可少的。

步态变异分析允许同时评估例如像帕金森病、脑溢血、坐骨神经痛等神经系统疾病的动物模型中运动性能的静态(例如，协调性、爪压、爪子接触面积)和动态(例如，支撑相时间、摆动相、支撑相比例、步幅、摆动速度)的参数，然而，在短暂局灶性缺血性脑卒中的小鼠模型中，对步态变化的描述很少，因此限制了目前对该病病理生理学的理解，对缺血性中风小鼠模型步态变异性进行更全面的评估，对于研究脑缺血导致的运动障碍具有重要的生物学和临床意义，其有利于制定有针对性的治疗方案。

发明内容

本发明为了解决现有技术中对短暂局灶性缺血性脑卒中(TIA)的小鼠模型的步态变化的研究少，缺乏对该病有针对性的治疗方案的技术问题，通过构建缺血性卒中动物模型，并研究缺血性卒中动物模型的步态变化与缺血相关基因的关联性，以期为缺血性卒中提供新的治疗方向。

根据本发明的一个方面，本发明首先提供了一种用于辅助诊断缺血性卒中，或监测缺血性卒中(缺血性卒中为亚急性期的缺血性卒中)治疗效果的药盒，所述药盒包括：用于扩增至少一种脑缺血相关基因P2RY12、NOS1、UCP2、MMP9和VWf的引物。

本发明通过下述研究和分析构思最终得以完成的：

首先，通过使用计算机辅助猫道系统进行自动步态分析，检查第7天经大脑中动脉栓塞脑局部缺血(MCAO)处理的小鼠大脑中动脉栓塞脑局部缺血模型(选择第7天MCAO处理得到的小鼠模型，以模拟亚急性期的缺血性卒中)中观察到的182个步态参数来填补这一研究空白，其中182个步态参数中有39个步态参数与假手术组具有显著差异。