[发明专利]一种获取植物木质部的方法

说明书

本发明公开了一种获取植物木质部的方法。它是将含有木质部的植物组织采用直接液氮速冻后半包埋方式获得冰冻切片，再用激光显微切割方法获取其中的木质部。本发明通过冰冻切片和激光显微切割技术相结合，成功的分离到黄梁木的纯的木质部组织。本发明公开的方法相比于前人的木质部细胞获得方法定位更加精确，细胞同质性较高，为进一步研究木质部的分子生物学及基因组学研究奠定基础。

技术领域：

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种获取植物木质部的方法。

背景技术：

木质部是维管植物输导组织的重要组成部分，担负将根吸收的水分及溶解于水里的养分往上运输，供其他器官组织使用，并兼具一定的支撑作用。木质部导管和管胞最显著的特点是在初生壁和质膜之间由纤维素、半纤维素和木质素沉积形成环状、螺旋、网状或者孔纹的次生细胞壁，成熟时细胞死亡，细胞内含物全部消失，形成空洞的管子。利用细胞学和分子生物学的方法研究木质部的发育和物质运输功能具有重要的意义。

黄梁木(Neolamarckia cadamba)是热带亚热带地区广泛分布的茜草科团花属速生阔叶树种，不仅生长十分迅速而且材质致密。其快速生长依赖于包括初生木质部和次生木质部在内的整个木质部细胞的发育进程。因此，解析木质部细胞生长与发育的分子调控机制对于促进热带亚热带阔叶树种的遗传改良与应用具有重要作用。然而，在木本植物中尤其是速生树种中如何获得高质量的特定组织或细胞仍然是一道技术难题。

发明内容：

本发明的目的是提供一种能够成功的分离到纯的木质部组织的获取植物木质部的方法。

本发明的获取植物木质部的方法，是将含有木质部的植物组织采用直接液氮速冻后半包埋方式获得冰冻切片，再用激光显微切割方法获取其中的木质部。

所述的植物为黄粱木。

所述的含有木质部的植物组织是试管苗移栽后三月龄幼苗的茎节。

所述的含有木质部的植物组织采用直接液氮速冻后半包埋方式获得冰冻切片包括将含有木质部的植物组织进行预处理、包埋、切片，粘片与脱水的步骤。

所述的将含有木质部的植物组织进行预处理是首先卡诺氏固定液固定植物组织，然后用质量分数15～25％蔗糖PBS溶液保护材料，再用液氮速冻材料30～60s。

所述的包埋为半包埋方式，只对材料接触样品陀的部分进行包埋，所用的包埋剂为OTC包埋剂。

所述的冰冻切片厚度为14μm-18μm，最优选是14μm。

所述的粘片是切片在滴有无水酒精的聚乙烯萘(PEN)的RNase-free膜玻片上粘片。

所述的脱水条件是将玻片放在装有无菌二氧化硅的切片盒中干燥10-20min。

所述的激光显微切割采用的是LeicaAS LMD 7000激光显微切割系统，在5-10倍物镜下，所使用的激光参数为：power(能量)37-46，Aperture(孔径)1-8，Speed(速度)6-7，Head Current(发射强度)100％，Pulse Frequency(脉冲频率)1101。

本发明通过冰冻切片和激光显微切割技术相结合，成功的分离到黄梁木的纯的木质部组织。本发明公开的方法相比于前人的木质部细胞获得方法定位更加精确，细胞同质性较高，为进一步研究木质部的分子生物学及基因组学研究奠定基础。

附图说明：

图1是黄粱木幼苗茎段取材示意图

图2是卡诺氏固定液固定后加入15％蔗糖PBS溶液的冰冻切片显微结构图：A.茎节横切切片显微结构图，B.A图中木质部局部放大图