[发明专利]CRISPR/Cas9系统及其在构建α、β和α＆β地中海贫血模型猪细胞系中的应用有效
| 申请号： | 201910890978.2 | 申请日： | 2019-09-20 |
| 公开（公告）号： | CN112538497B | 公开（公告）日： | 2023-02-28 |
| 发明（设计）人： | 牛冬;汪滔;王德华;王磊;程锐;曾为俊;马翔 | 申请（专利权）人： | 南京启真基因工程有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/90;C12N9/22;C12N5/10;C12N15/113 |
| 代理公司： | 杭州合信专利代理事务所(普通合伙) 33337 | 代理人： | 沈自军 |
| 地址： | 211306 江苏省南*** | 国省代码： | 江苏;32 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | crispr cas9 系统 及其 构建 地中海贫血 模型 细胞系 中的 应用 | ||
1.CRISPR/Cas9系统，包括第一gRNA载体、第二gRNA载体和Cas9表达载体，其特征在于，
所述第一gRNA载体的靶点序列为CCTTGACCTGGTCGGAGCCG，所述第二gRNA载体的靶点序列为CGGGTCCACACGCAGCTTGT；所述Cas9表达载体的碱基序列如SEQ ID NO:70所示；所述第一gRNA载体、第二gRNA载体和Cas9表达载体的摩尔比为1.5～2:1.5～2:1。
2.根据权利要求1所述的CRISPR/Cas9系统，其特征在于，gRNA载体的原始载体为pKG-U6gRNA。
3.CRISPR/Cas9系统，包括第三gRNA载体、第四gRNA载体和Cas9表达载体，其特征在于，
所述第三gRNA载体的靶点序列为GGCATTGGACAGGTCCCCAA，所述第四gRNA载体的靶点序列为TCAGGCCGTCACTGAAGGAC；所述Cas9表达载体的碱基序列如SEQ ID NO:70所示；所述第三gRNA载体、第四gRNA载体和Cas9表达载体的摩尔比为1.5～2:1.5～2:1。
4.根据权利要求3所述的CRISPR/Cas9系统，其特征在于，gRNA载体的原始载体为pKG-U6gRNA。
5.CRISPR/Cas9系统，包括第一gRNA载体、第二gRNA载体、第三gRNA载体、第四gRNA载体和Cas9表达载体，其特征在于，
所述第一gRNA载体的靶点序列为CCTTGACCTGGTCGGAGCCG，所述第二gRNA载体的靶点序列为CGGGTCCACACGCAGCTTGT；
所述第三gRNA载体的靶点序列为GGCATTGGACAGGTCCCCAA，所述第四gRNA载体的靶点序列为TCAGGCCGTCACTGAAGGAC；
所述Cas9表达载体的碱基序列如SEQ ID NO:70所示；
所述第一gRNA载体、第二gRNA载体、第三gRNA载体、第四gRNA载体和Cas9表达载体的摩尔比为0.75～1:0.75～1:0.75～1:0.75～1:1。
6.根据权利要求5所述的CRISPR/Cas9系统，其特征在于，gRNA载体的原始载体为pKG-U6gRNA。
7.构建地中海贫血模型猪细胞系的方法，其特征在于，包括以下步骤：将权利要求1或2所述的CRISPR/Cas9系统转入猪耳原代成纤维细胞中，筛选基因突变单克隆细胞。
8.根据权利要求7所述的方法构建得到的α地中海贫血模型猪细胞系。
9.构建地中海贫血模型猪细胞系的方法，其特征在于，包括以下步骤：将权利要求3或4所述的CRISPR/Cas9系统转入猪耳原代成纤维细胞中，筛选基因突变单克隆细胞。
10.根据权利要求9所述的方法构建得到的β地中海贫血模型猪细胞系。
11.构建地中海贫血模型猪细胞系的方法，其特征在于，包括以下步骤：将权利要求5或6所述的CRISPR/Cas9系统转入猪耳原代成纤维细胞中，筛选基因突变单克隆细胞。
12.根据权利要求11所述的方法构建得到的αβ地中海贫血模型猪细胞系。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于南京启真基因工程有限公司，未经南京启真基因工程有限公司许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201910890978.2/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
- 上一篇：一种电视耗能管理方法及相关设备
- 下一篇：一种激光匀化照明光路及装置
