[发明专利]一种黄河鲤稚鱼肌间骨染色的方法

权利要求书

1.一种黄河鲤稚鱼肌间骨染色的方法，其特征在于具体过程为：

（1）对出膜后22-26天的小鱼进行取材，并用3wt%-5wt%的PFA固定24小时，其中PFA是将3-5g的多聚甲醛溶于PBS中，pH调至7.2；

（2）染色前先用蒸馏水漂洗鱼体，每次10分钟，漂洗三次，去除固定液；

（3）再转移鱼体到TBST溶液中漂洗20-30分钟；

（4）然后用蒸馏水漂洗10分钟，去除残余的TBST；

（5）转移鱼体到1wt% KOH溶液，浸泡30分钟，根据鱼体过大程度适当延长时间，直至头部透明；

（6）转移鱼体到新的1wt% KOH溶液中，再加入茜素红染液进行染色，KOH溶液与茜素红染液的体积比例为3:1，于19-31℃进行染色，染色时间8-12小时；

（7）倒掉染色液，加入蒸馏水，洗去多余的染色液，重复洗1-2次，直至蒸馏水没有明显颜色；

（8）用1wt% KOH溶液稀释双氧水，将双氧水稀释成体积浓度为1%-5%，在强光下照射，至鱼体表面出现大量气泡为止，脱去鱼体表面色素，此过程5-20分钟；

（9）倒掉溶液，加入1wt% KOH溶液，洗去残余的双氧水；

（10）将黄河鲤稚鱼放置体积分数20%、50%的甘油水溶液中梯度透明，透明0-30分钟；

（11）用体式镜观察染色结果并拍照留存；

（12）在100%甘油中保存黄河鲤稚鱼。

2.根据权利要求1所述的黄河鲤稚鱼肌间骨染色的方法，其特征在于具体步骤为：

（1）对出膜后24天的小鱼进行取材，并用4wt% PFA固定24小时；

（2）染色前先用蒸馏水漂洗鱼体，每次10分钟，漂洗三次，去除固定液；

（3）再转移鱼体到TBST溶液中漂洗30分钟；

（4）然后用蒸馏水漂洗10分钟，去除残余的TBST；

（5）转移鱼体到1wt% KOH溶液，浸泡30分钟，根据鱼体过大程度适当延长时间，直至头部透明；

（6）转移鱼体到新的1wt% KOH溶液中，再加入茜素红染液进行染色，KOH溶液与茜素红染液的体积比例为3:1，25℃常温染色，染色时间10小时；

（7）倒掉染色液，加入蒸馏水，洗去多余的染色液，重复洗1-2次，直至蒸馏水没有明显颜色；

（8）用1wt% KOH溶液稀释双氧水，将双氧水稀释成体积浓度为3%，在强光下照射，至鱼体表明出现大量气泡为止，脱去鱼体表面色素，此过程10分钟；

（9）倒掉溶液，加入1wt% KOH溶液，洗去残余的双氧水；

（10）将黄河鲤稚鱼放置体积分数20%、50%的甘油水溶液中梯度透明，透明30分钟，可根据颜色深浅在体积分数50%的甘油水溶液中延长透明时间；

（11）用体式镜观察染色结果并拍照留存；

（12）在体积分数100%甘油中保存黄河鲤稚鱼。