[发明专利]一种提高动物繁殖力的AMH-GNIH双表达DNA疫苗及其构建方法与应用

权利要求书

1.一种含有提高动物繁殖力的AMH-GNIH双表达基因疫苗的工程菌，其特征在于，该工程菌于2018年8月15日保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号：CCTCC M 2018542。

2.由权利要求1所述工程菌株制备的AMH-GNIH双表达基因疫苗。

3.一种提高动物繁殖力的AMH-GNIH双表达基因疫苗，其特征在于，其包括tPA-SAMH基因和tPA-SRFRP基因，所述tPA-SAMH的基因序列如SEQ ID NO.1所示，所述tPA-SRFRP的基因序列如SEQ ID NO.2所示。

4.根据权利要求3所述的双表达基因疫苗，其特征在于，所述tPA-SAMH基因和tPA-SRFRP基因之间连接有2A肽，所述2A肽的基因序列如SEQ ID NO.3所示，所述AMH-GNIH双表达基因疫苗的基因序列是SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.2所示序列依次连接。

5.一种提高动物繁殖力的AMH-GNIH双表达基因疫苗的制备方法，其特征在于如下操作步骤：

S1、将质粒PVAX-tPA-SAMH-asd和PVAX-tPA-SRFRP-asd进行PCR扩增，获得tPA-SAMH、tPA-SRFRP扩增产物片段；所述tPA-SAMH扩增产物片段含如SEQ ID NO.1所示的序列，所述tPA-SRFRP扩增产物片段含如SEQ ID NO.2所示的序列；

S2、将pVAX-asd和tPA-SRFRP PCR扩增产物进行EcoR I和XhoI酶切，连接，获得质粒PVAX-tPA-SRFRP-asd；

S3、将PVAX-tPA-SRFRP-asd和tPA-SAMH PCR产物进行Hind III和Kpn I酶切，连接，获得质粒PVAX-tPA-SAMH-tPA-SRFRP-asd；

S4、2A肽拼接头经上海生工合成并克隆于PUC57载体上；其中，所述2A肽含如SEQ IDNO.3所示的序列；

S5、将PVAX-tPA-SAMH-tPA-SRFRP-asd和PUC57-2A'-2A质粒进行Kpn I和BamH I酶切，连接，获得质粒PVAX-tPA-SINH-2A-tPA-SRFRP-asd；

S6、将PVAX-tPA-SRFRP-asd进行PCR扩增，引入酶切位点BamH I和Xho I(置换酶切位点)，获得tPA-SRFRP扩增产物片段；将S4获得的PVAX-tPA-SAMH-2A-tPA-SRFRP-asd和tPA-SRFRP扩增产物片段进行BamH I和Xho I酶切，连接，获得质粒PVAX-tPA-SAMH-2A-tPA-SRFRP-asd。

6.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，在步骤S1中，所述对质粒PVAX-tPA-SRFRP-asd进行PCR扩增的引物对如SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示。

7.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，在步骤S1中，将质粒PVAX-tPA-SAMH-asd进行PCR扩增的引物对如SEQ ID NO.6和SEQ ID NO.7所示。

8.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，在步骤S1中，将质粒PVAX-tPA-SRFRP-asd进行PCR扩增的引物对如SEQ ID NO.8和SEQ ID NO.9所示。

9.如上所述的提高动物繁殖力的AMH-GNIH双表达基因疫苗或上述所述的制备方法制备的疫苗在制备提高动物繁殖力药品中的应用。