[发明专利]一种酶解兔血发酵液制备抗氧化低聚肽的方法

权利要求书

1.一种酶解兔血发酵液制备抗氧化低聚肽的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

(1)、分别制备枯草芽孢杆菌种子培养液、凝结芽孢杆菌种子培养液和植物乳杆菌种子培养液；按体积比3:1:1的比例，将枯草芽孢杆菌种子培养液、凝结芽孢杆菌种子培养液和植物乳杆菌种子培养液混合，得到混合种子液；

(2)、以灭菌后的兔血作为培养底物，将混合种子液接种至培养底物中，接种量为4.5％；

(3)、对步骤(2)所得物，在37℃、135r/min转速下，培养3.5天，取所得培养液的上清液；

(4)、利用碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶混合酶液对步骤(3)所得上清液进行酶解，酶解时，酶底比为200U/g、酶解时间2.5h、pH值8.5、酶解温度60℃；其中，碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶的活力单位之比为2:1；

(5)、对步骤(4)所得的酶解液进行离心、抽滤和超滤，即得抗氧化肽；

所述枯草芽孢杆菌为：SICC1.197.保藏于四川省微生物资源平台菌种保藏中心；所述凝结芽孢杆菌为：CGMCCNo.6729，保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心；所述植物乳杆菌为：CGMCCNo.5105，保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心；

所述枯草芽孢杆菌种子培养液、凝结芽孢杆菌种子培养液和植物乳杆菌种子培养液的菌浓均为1×10⁹cfu/mL；

在进行所述超滤时，选用5KD的滤膜进行超滤。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌种子培养液是将活化好的枯草芽孢杆菌斜面菌种单菌落接种入灭菌后的种子液体培养基中，于35℃，转速135r/min的恒温振荡培养箱中培养12h，所述种子液体培养基的配方为：葡萄糖10g/L、牛肉膏10g/L、蛋白胨10g/L、氯化钠5g/L，pH＝7.0。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述凝结芽孢杆菌种子培养液是将活化好的凝结芽孢杆菌斜面菌种单菌落接种入灭菌后的种子液体培养基中，于35℃，转速135r/min的恒温振荡培养箱中培养12h，所述种子液体培养基的配方为：葡萄糖6g/L、牛肉膏10g/L、蛋白胨10g/L、磷酸一氢钾2g/L、七水硫酸锰1g/L，pH＝7.0。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述植物乳杆菌种子培养液是将活化好的植物乳杆菌斜面菌种单菌落接种入灭菌后的种子液体培养基中，于35℃，转速135r/min的恒温振荡培养箱中培养12h，所述种子液体培养基的配方为：葡萄糖20g/L、牛肉膏10g/L、蛋白胨10g/L、磷酸一氢钾2g/L、七水硫酸锰0.25g/L、柠檬酸三钠3g/L，pH＝7.0。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述兔血的浓度为10g/mL。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(5)中，进行离心时，用高速冷冻离心机进行离心，离心参数为：温度为4℃、转速为6000r/min、时间20min。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(5)中，进行抽滤时，利用0.45μm滤膜过滤；进行超滤时，利用5KD滤膜于离心机进行，离心参数为：温度4℃，转速4000r/min，时间10min。