[发明专利]提高中华羊茅-内生真菌菌株PA次生代谢产物波胺含量的方法

说明书

本发明提供提高中华羊茅(Festuca sinensis)‑内生真菌( sp.)菌株PA次生代谢产物波胺含量的方法，包括以下步骤：(1)将中华羊茅‑内生真菌菌株PA的菌丝接种到平板PDA培养基上进行黑暗培养；(2)接种至M102种子液体培养基中继续培养；(3)接种至M104T培养基中进行发酵培养，离心，收集滤液。本发明率先利用中华羊茅(Festuca sinensis)‑内生真菌( sp.)菌株PA的发酵液为材料，通过单因素实验和正交实验优化发酵条件(pH、装液量、接种量、接种时间、摇床转速和温度)，提高菌株代谢产物活性物质的产率，为微生物农药研发提供基础资料。

技术领域

本发明涉及提高中华羊茅(Festuca sinensis)-内生真菌菌株PA次生代谢产物波胺含量的方法。

背景技术

内生真菌是指在其生活史的部分或全部阶段生活于植物组织内，对植物没有引起明显病害症状的真菌(Siegel et al.,1987；李秀璋等,2014)。研究表明禾草内生真菌至少可以产生四大类十种具有生物活性的生物碱，分别是以震颤素(lolitrem B)为代表的吲哚双萜类(lndolditerpene)、以波胺(peramine)为代表的吡咯并吡嗪类(pyrrolopyrazine)、以麦角新碱(ergonovine)和麦角酰胺(ergine)为代表的麦角碱类(ergot alkaloids)、以黑麦草碱(loline)为代表的饱和吡咯类化合物(pyrrolizidine)等(高嘉卉和南志标,2007；徐瑞等,2012；李秀璋等,2015)。四大类生物碱均对某些线虫和食草昆虫具有一定的毒性，但波胺占主导地位(Rowan etal.,1986；Ball et al.,1995)。据统计超过77种禾草被认定为携带有禾草内生真菌(师茜等,2018)，已分离鉴定出45种禾草内生真菌(Leuchtmann et al.,2014；金文进等,2015；Shymanovich etal.,2017；Mihwa etal.,2018)，并且其至少对79个种的害虫表现出较明显的抗性(李秀璋等,2015；Xia et al.,2018)。说明禾草内生真菌资源丰富，有作为潜在生防因子的潜力。

众多研究人员发现纯培养条件下，禾草内生真菌亦可以产生一些生物碱等次生代谢产物(Blankenship et al.,2001；Yue et al.,2000；高嘉卉,2007)，其对害虫具有较高毒力作用(Christensen and Latch,1991；Faeth,2002；张雪兵等,2010；Schardlet al.,2013)，说明其可以作为生防资源，但是含量较低(高嘉卉,2007)。

发明内容

为了解决现有技术中存在的问题，本发明提供了提高中华羊茅(Festucasinensis)-内生真菌菌株PA次生代谢产物波胺含量的方法。通过单因素实验和正交实验优化发酵条件，来提高菌株代谢物产量，缩短发酵时间，降低耗能，减少污染。

为了实现上述技术目的，本发明采用的技术方案为：

本发明提供提高中华羊茅(Festuca sinensis)-内生真菌菌株PA次生代谢产物波胺含量的方法，包括以下步骤：

(1)将中华羊茅(Festuca sinensis)-内生真菌菌株PA的菌丝接种到平板PDA培养基上进行黑暗培养；

(2)接种至M102种子液体培养基中继续培养；

(3)接种至M104T培养基中进行发酵培养，离心，收集滤液。

作为优选，步骤(1)中，所述黑暗培养是在22℃下黑暗培养四周。

作为优选，步骤(2)中，所述培养是在22℃，转速200r/min的条件下黑暗培养四周。

作为优选，步骤(3)中，所述发酵培养的条件为：黑暗培养，初始pH8-10，装液量25-100mL，接种量0.5％-5％，接种时间14d-28d，转速120r/min-160r/min，温度20℃-30℃。