[发明专利]一种高产D-泛解酸内酯水解酶的方法

说明书

本发明涉及一种新的串珠镰刀菌菌株。本发明进一步涉及一种高产D‑泛解酸内酯水解酶的方法，该方法将保藏编号为CGMCC No.18129的串珠镰刀菌菌株进行发酵培养，从发酵产物中提取D‑泛解酸内酯水解酶。应用上述特定菌株进行发酵生产，可以得到高酶活的D‑泛解酸内酯水解酶发酵液，从而高效获得高品质的D‑泛解酸内酯水解酶。

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种诱变及高产D-泛解酸内酯酶菌种的方法。

背景技术

D-泛解酸是制造D-泛酸的重要手性中间体，泛酸作为食品和饲料添加剂的需求量很大，其产品多以D-泛酸钙形式存在，供不应求。D-泛酸钙(右旋泛酸钙)，为维生素类药物，广泛应用于医药、食品、饲料工业。

目前制备D-泛酸一般采用化学或者生物拆分法。化学法拆分存在拆分剂贵、成本高、分离困难等确定，同时还带来严重的环境污染问题。生物法主要是微生物酶法，即将合成的中间体DL-泛解酸内酯或其类似物，用微生物产生的D-泛解酸内酯水解酶进行转化拆分成D-泛解酸内酯，再合成D-泛酸钙，具有环境污染及毒性少等优点。

产D-泛解酸内酯水解酶的微生物有很多，不同微生物产酶的效果也不同，因此筛选高产D-泛解酸内酯水解酶的菌种尤为重要。

发明内容

本发明的第一目的是提供一种保藏编号为CGMCC No.18129的串珠镰刀菌。

所述保藏编号为CGMCC No.18129的串珠镰刀菌保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心(China General Microbiological Culture Collection Center，CGMCC)，地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101，保藏编号为CGMCC No.18129，保藏日期2019年8月29日，分类命名为：串珠镰刀菌。

具体而言，本发明提供的高产D-泛解酸内酯水解酶的菌种采用如下方法获得：

(1)将待诱变菌种经过常压室温等离子体诱变，获得多个诱变菌种；

(2)将所述多个诱变菌种分别接入产酶培养基进行培养；

(3)分别检测各个诱变菌种培养所得的产物中D-泛解酸内酯水解酶的活性，选择酶活最高的菌种为目标菌种。

本发明所述待诱变菌种可采用如下方法获得：取多个未诱变的、可产生D-泛解酸内酯水解酶的菌种，分别涂布于初筛培养基进行培养，筛选变色圈圈径最大的菌种，作为待诱变菌种。本发明优选每升所述初筛培养基含有如下组分：100～200g马铃薯浸汁，10～30gD-泛解酸内酯，0.01～0.1g溴百里酚蓝，10～20g琼脂。在所述初筛培养基上进行培养的条件优选为：25～30℃、培养3～5天。

本发明采用常压室温等离子体诱变方法诱变获得高产D-泛解酸内酯水解酶的菌种。在实际操作中，可将所述待诱变菌种先接入一级种子培养基，培养至对数生长期后，将菌液离心弃上清收集菌体，用无菌生理盐水将菌体制成浓度为10⁶～10⁸个/mL的菌悬液，取5～15μL所述菌悬液均匀涂布在载片上，进行常压室温等离子体诱变。优选地，每升所述一级种子培养基中含有如下成分：10～15g甘油，10～15g大豆蛋白胨，1～5g玉米浆干粉，5～10g酵母浸膏，5～10g豆粕粉，培养基pH为7.0～7.5。