[发明专利]一种利用量子点敏化上转换纳米材料检测凝血酶的方法

权利要求书

1.一种利用量子点敏化上转换纳米颗粒检测凝血酶的方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）制备适配体TBA1修饰的上转换纳米粒子；

（2）制备适配体TBA2修饰的Ag₂Se量子点：将Ag₂Se量子点与一端修饰有氨基的适配体TBA2反应，得到TBA2修饰的Ag₂Se量子点；

（3）绘制凝血酶检测的标准曲线：将步骤（1）所得上转换纳米粒子和步骤（2）所得的Ag₂Se量子点加入到缓冲溶液中，并向其中加入不同量的凝血酶进行孵育，将孵育后的溶液用激光光源激发得到荧光强度，设定凝血酶的浓度为0时，所得空白样强度记为F₀，以荧光比率F/F₀为纵坐标，以凝血酶在缓冲溶液中的浓度为横坐标绘制标准曲线；

（4）将待测样品用缓冲溶液进行稀释，在与步骤（3）相同的条件下测定荧光强度，进而根据步骤（3）所得标准曲线，获得待测样品中的凝血酶浓度。

2.根据权利要求1所述的一种利用量子点敏化上转换纳米颗粒检测凝血酶的方法，其特征在于所述的上转换纳米粒子的吸收光谱和Ag₂Se量子点的发射光谱相重叠。

3.根据权利要求1所述的一种利用量子点敏化上转换纳米颗粒检测凝血酶的方法，其特征在于所述的上转换荧光纳米粒子的化学式为NaYF₄:Yb,Er，形貌为球形，粒径为20-28nm；所述Ag₂Se量子点的粒径为3-4 nm，形貌为球形，表面带有羧基。

4.根据权利要求1所述的一种利用量子点敏化上转换纳米颗粒检测凝血酶的方法，其特征在于所述的单链核酸TBA1和单链核酸TBA2的5’端都修饰有氨基，其序列分别为：5’-NH₂-TTTTTAGTCCGTGGTAGGGCAGGTTGGGGTGACT-3’和5’-NH₂-TTTTTGGTTGGTGTGGTTGG-3’。

5.根据权利要求1所述的一种利用量子点敏化上转换纳米颗粒检测凝血酶的方法，其特征在于步骤（2）中，Ag₂Se量子点和TBA2反应时的比例为5 μmol：（0.5-3）nmol。

6.根据权利要求1所述的一种利用量子点敏化上转换纳米颗粒检测凝血酶的方法，其特征在于步骤（3）中，所述的缓冲溶液为HEPES缓冲溶液， pH为7.0-7.5。

7.根据权利要求1所述的一种利用量子点敏化上转换纳米颗粒检测凝血酶的方法，其特征在于步骤（3）中，缓冲溶液中凝血酶的加入量以其在缓冲溶液中的浓度计为0-125 nM。

8.根据权利要求1所述的一种利用量子点敏化上转换纳米颗粒检测凝血酶的方法，其特征在于步骤（3）中，步骤（2）所得的Ag₂Se量子点的加入量以其在缓冲溶液中的浓度计为0.08-0.4 µM。

9.根据权利要求1所述的一种利用量子点敏化上转换纳米颗粒检测凝血酶的方法，其特征在于步骤（3）中，所述的孵育时间为2-5 h，孵育温度为37℃。

10.根据权利要求1所述的一种利用量子点敏化上转换纳米颗粒检测凝血酶的方法，其特征在于所述待测样品为血浆样品，需要先经过预处理将其中的凝血酶原转化为凝血酶原。