[发明专利]活检组织代谢物的检测试剂在制备前列腺癌诊断试剂上的应用及试剂盒和定性定量分析方法

说明书

一种活检组织代谢物的检测试剂在制备前列腺癌诊断试剂上的应用及试剂盒和定性定量分析方法,提供的活检组织代谢物群可用于诊断区分前列腺增生和前列腺癌，具有检测速度快，重复性和诊断灵敏度高的特点，可以作为传统的组织病理切片分析的辅助方法,检测试剂盒可用于前列腺癌诊断，加快诊断速度，提高诊断便利性和标准化。

技术领域

本发明具体涉及分析化学及临床医学技术领域，具体涉及一种活检组织代谢物的检测试剂在制备前列腺癌诊断试剂上的应用及试剂盒和定性定量分析方法。

背景技术

前列腺癌是男性最为常见的癌症之一，其发生率和死亡率分别位居第二和第五，2018年全世界新增130万前列腺癌患者，新增死亡人数将达35.9万(1)。如何有效地防控和治疗前列腺癌迫在眉睫，但是，临床上对前列腺癌的诊疗经常存在过度诊断或者误诊等情况，对其治疗极为不利，因此精准分型诊断对于前列腺癌的精准治疗非常关键。

前列腺癌诊断分型的方法目前主要有肛门指诊、前列腺特异性抗原测定、影像学检查以及经直肠超声引导下穿刺活检，但是前三种诊断方法特异性差，存在很大的误诊率。经直肠超声引导下穿刺活检可以获得组织样品进行病理切片检查，这种方法可以作为前列腺癌诊断分型的金标准，但是目前仍缺乏基于活检组织的前列腺癌诊断标志物。组织代谢标志物一方面可以辅助病理切片诊断，另外具有分析速度快、可操作性强等优点。

代谢组学分析技术是指运用先进的分析方法尽可能多地测定生物样品中的代谢物，分析它们由于疾病或者药物作用而产生的特异性变化，从而鉴定疾病发生发展或者药物治疗过程中的代谢标志物。代谢组学作为一种组学诊断技术在前列腺癌研究领域已有初步的尝试和运用，比如，早在2009年，Sreekumar等研究者在《Nature》杂志上报道利用代谢组学技术鉴定尿液中肌氨酸可以作为前列腺癌的诊断标记物。Pérez-Rambla等人发现尿液中支链氨基酸、谷氨酸、甘氨酸等氨基酸以及血中精氨酸、酰基肉碱等代谢物能够很好地区分前列腺癌与前列腺增生患者。Schmidt等研究者报道血浆中酰基肉碱、甘油磷脂和鞘脂类代谢物可以用于前列腺癌风险评估。Kumar等研究者发现血清中的丙氨酸、丙酮酸和甘氨酸可以很好地区分低级别和高级别前列腺癌。另外，Lima等人总结了前列腺癌患者和正常人之间具有显著差异的组织代谢物，主要包括柠檬酸、精胺、胆碱、乳酸、丙氨酸和谷氨酸。

鉴于此，测定生物样本中小分子代谢物的含量变化，有利于了解前列腺细胞的代谢变化，以便辅助诊断区分前列腺癌患者。这种方法具有简便、快速的优点，对于临床前列腺癌的诊断具有重要意义。

发明内容

为了解决现有技术存在的技术缺陷，本发明提供了一种活检组织代谢物的检测试剂在制备前列腺癌诊断试剂上的应用及试剂盒和定性定量分析方法，为前列腺癌活检组织病理切片分析提供一种基于代谢分析的辅助诊断方法，提供一种新的前列腺活检组织代谢物组合，该代谢物组合可作为标志物应用于前列腺癌诊断，该组代谢标志物同时存在于活检组织中，可以同步分析测定。另外，本发明提供一种基于活检组织的代谢标志物群检测试剂盒，用于诊断区分前列腺癌患者，加快诊断速度，提高诊断便利性。

本发明采用的技术解决方案是：一种活检组织代谢物的检测试剂在制备前列腺癌诊断试剂上的应用，所述的活检组织代谢物为乳酸、丙氨酸、甘氨酸和胆碱中的一种或几种。所述诊断包括前列腺增生和前列腺癌患者。

一种基于活检组织代谢物的诊断前列腺癌的试剂盒，包含所述的活检组织代谢物的化学单体或混合物，作为诊断试剂盒的标准品。

所述的试剂盒还包含活检组织代谢物提取的溶剂及核磁共振波谱分析所需试剂。

所述的活检组织代谢物提取的溶剂包括甲醇和氯仿。

所述标准品均为分析纯以上规格。使用标准品可以准确地对代谢标志物进行定性和定量分析，有助于检测标准化，提高重现性。

所述的核磁共振波谱分析所需试剂包括重水和2,3,3-三甲基甲硅烷基丙酸（TSP）。