[发明专利]一种特异性结合甲壳类原肌球蛋白的核酸适配体及其应用

权利要求书

1.一种特异性结合甲壳类原肌球蛋白的核酸适配体，其特征在于，其具有SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列。

2.如权利要求1所述的核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体的5’端经荧光基团修饰。

3.权利要求1所述的核酸适配体的筛选方法，其特征在于，包括：

构建甲壳类原肌球蛋白随机DNA文库，对文库进行预处理，处理条件为：95℃热变性5min，冰温冷却5min，用100mmol/L pH为8.2的硼砂-硼酸盐溶液溶解，得到随机ssDNA文库；

将ssDNA文库与原肌球蛋白按最终浓度比2:1混合，混合成200μL体系，37℃下孵育30min，得到混合溶液；

所述混合溶液通过毛细管电泳法筛选，获得核苷酸序列为SEQ ID NO:2所示的适配体，所述适配体以SEQ ID NO:3～4所示的核苷酸序列为引物进行PCR扩增，并进行平衡解离常数的测定，选择解离常数最小的，即获得特异性结合甲壳类原肌球蛋白的核酸适配体。

4.如权利要求3所述的筛选方法，其特征在于，所述混合溶液通过毛细管电泳法筛选包括：检测波长为214nm，进样方式为压力进样，分离电压为+8kv，毛细管柱温为25℃，运行缓冲液为100mmol/L硼砂缓冲溶液；将第一轮产物收集到装有原肌球蛋白的样品瓶中，37℃孵育30min，用于进行第二轮筛选；以上步骤循环多轮；直至循环至第四轮，适配体的峰面积维持稳定，停止筛选，以获得所述适配体。

5.一种生物传感器，其特征在于，包括多巴胺纳米球和核酸探针，所述多巴胺纳米球上修饰有权利要求1所述的核酸适配体的互补序列的核酸和mPEG，所述核酸探针为权利要求2所述的核酸适配体，所述多巴胺纳米球和所述核酸探针通过碱基互补配对连接。

6.一种甲壳类原肌球蛋白的检测试剂盒，其特征在于，包括如权利要求5所述的生物传感器、原肌球蛋白核酸适配体检测溶液以及盐溶液。

7.如权利要求6所述的检测试剂盒，其特征在于，所述盐溶液为Tris-HCl缓冲液，盐浓度为10～15mmol，pH为8.5～9.0。