[发明专利]一种复合多糖脂质体包封率的检测方法

权利要求书

1.一种复合多糖脂质体包封率的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1：取待测复合多糖脂质体进行离心，取上清液B；

步骤2：取与步骤1相同体积的待测复合多糖脂质体，加入无水甲醇超声破乳，加水后离心，取上清液C；

步骤3：将上清液B和上清液C分别水解后分别进行柱前衍生化；

步骤4：将柱前衍生化后的上清液B和上清液C分别进行液相色谱检测，分别得到色谱图D和色谱图E；

步骤5：将色谱图D和色谱图E中的F单糖的峰面积分别代入回归方程中，从而得到待测复合多糖脂质体中未包封的复合多糖的浓度和待测复合多糖脂质体的总的复合多糖的浓度，再依据步骤1和步骤2中的体积，计算得到待测复合多糖脂质体中未包封的复合多糖的质量m_未和待测复合多糖脂质体的总的复合多糖的质量m_总，复合多糖脂质体包封率即为(m_总-m_未)/m_总*100％；

所述回归方程由以下过程得到：分别取梯度浓度的复合多糖A，复合多糖A与待测复合多糖脂质体中的复合多糖相同，分别进行与步骤3相同的水解和柱前衍生化，然后分别进行液相色谱检测，得到各个梯度浓度的复合多糖A的色谱图，选择水解后的F单糖的峰面积作为因变量，复合多糖A的浓度为自变量，建立回归方程。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述待测复合多糖脂质体中的复合多糖为玉屏风复合多糖、黄芪复合多糖、防风复合多糖和白术复合多糖中的一种。

3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，回归方程的制得过程中，所述F单糖为复合多糖A水解后浓度最大的单糖。

4.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述待测复合多糖脂质体中的复合多糖为玉屏风复合多糖，步骤1的离心条件为：12000r/min离心10min；步骤2的离心条件为：3000r/min离心10min。

5.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，步骤3中，水解的具体过程为：将上清液B和上清液C分别进行减压蒸发至干，各加入2mol/L三氟乙酸15mL，完全溶解后，置于密闭容器中，121℃的温度下加热120min，再将三氟乙酸减压蒸发除去，然后各加入10mL去离子水，充分溶解。

6.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，步骤3中，柱前衍生化的具体过程为：取水解后的上清液B和上清液C各100μL分别置于两根离心管中，分别加入50μL 0.5mol/L的PMP溶液和50μL 0.3mol/L的NaOH溶液，充分混匀，80℃水浴30min，待冷却后，再分别加入50μL 0.3mol/L的HCl溶液进行中和，再分别加入1mL氯仿萃取，3000r/min离心10min，去上清液，并重复萃取3次，经0.22μm滤膜过滤，将滤液-20℃保存备用。

7.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于，步骤4中，液相色谱的色谱条件为：4.6*250mm，5μm-Wondasil C18色谱柱；以磷酸盐缓冲溶液-乙腈为流动相，磷酸盐缓冲溶液的pH为6.8，磷酸盐缓冲溶液与乙腈的体积比为83：17；柱温为25℃；流速为1.0mL/min；进样量为20μL；检测波长为254nm。

8.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于，回归方程的制得过程中，梯度浓度为125、250、500、1000、2000、4000μg/mL。