[发明专利]一种抗癌胚抗原的抗体及其制备方法和用途

说明书

本发明提供一种抗CEA抗体，所述抗CEA抗体包括重链可变区和轻链可变区，重链可变区的互补决定区包括氨基酸序列如SEQ ID No.1所示的CDR‑H1、氨基酸序列如SEQ ID No.2所示的CDR‑H2和氨基酸序列如SEQ ID No.3所示的CDR‑H3，轻链可变区的互补决定区包括氨基酸序列如SEQ ID No.4所示的CDR‑L1、氨基酸序列如SEQ ID No.5所示的CDR‑L2和氨基酸序列如SEQ ID No.6所示的CDR‑L3。本发明发明人利用噬菌体展示技术对CEA scFv进行了筛选，从而获得了高亲和力的抗CEA的单链抗体。并将抗CEA的嵌合抗原受体基因通过基因工程方法导入T细胞制备CEA CAR‑T，使得CEA CAR‑T细胞特异性识别表达CEA的消化道肿瘤细胞并将其杀死，从而实现其抗肿瘤作用。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种抗癌胚抗原的抗体及其制备方法和用途。

背景技术

嵌合抗原受体修饰的T淋巴细胞(Chimeric antigen receptor T cells,CAR-T)的概念早在1989年就已出现，但在临床试验中一直没有达到理想的效果。此后的二十多年中，科学家们不断地对此进行尝试和优化，直到2011年，CD19(B lymphocyte antigenCD19,CD19)靶向的CAR-T细胞用于复发/难治性慢性B淋巴细胞白血病的临床研究，并取得了治愈的惊人疗效。到此，CAR-T细胞在肿瘤治疗上的应用开启了新的篇章。

嵌合抗原受体是人工合成的功能类似T细胞受体的融合蛋白，主要包括信号肽、抗原识别区、铰链区、跨膜区、胞内信号区。在结合靶抗原后，嵌合抗原受体形成聚体、通过胞内信号分子活化T细胞，分泌穿孔素和颗粒酶素B等实现对靶细胞的杀伤。因此，CAR-T细胞识别靶细胞不依赖于MHC(major histocompatibility complex,MHC)，从而可避免因肿瘤细胞MHC分子下调而导致的免疫逃逸。

近年来，嵌合抗原修饰的T淋巴细胞(CAR-T)发展迅速，目前已有两款产品获美国FDA批准上市，国内也有多个产品取得药物临床试验批准。目前CAR-T领域研究的靶点绝大多数为CD19，其次为BCMA(B-cell maturation antigen,BCMA)，前者靶向急性B淋巴细胞白血病，后者靶向多发性骨髓瘤，均为血液系统恶性疾病。然而，在占所有肿瘤发病类型90％以上的实体瘤上，CAR-T细胞的治疗效果却不甚理想。这有几方面的原因，其中重要的一点是缺乏理想的靶抗原。如前所述，CD19和BCMA都是特异性的表达于肿瘤细胞，而在正常组织中或细胞上表达有限，因此是十分理想的治疗靶点。相比之下，实体瘤特异性的靶点十分缺乏，多数靶点除在肿瘤细胞上表达，还广泛表达于正常的组织中。因此，CAR-T细胞治疗带来的“On target,off tumor”副作用十分明显。

国际癌症研究中心Globocan2012中指出肿瘤发病率及死亡率升高，男性中最常见的5种肿瘤中有3种是消化系统肿瘤(结直肠癌、胃癌、肝癌)，女性中最常见的5种肿瘤中有2种是消化系统肿瘤(结直肠癌、胃癌)(Steward BW等，2014)。可见在世界范围内，消化系统肿瘤占据了重要的地位。另据报道，国内胃癌、结直肠癌的发病率分别占据第二和第四位(陈万青等，2017)。消化系统肿瘤主要包括食管癌、胃癌、肝癌、结直肠癌、胰腺癌、胆管癌等，目前最有效的手段仍然是手术，对于那些缺乏手术指征的患者几乎没有特别有效的治疗手段，总体来说5年生存率依然很低，因此亟需发展新型的治疗手段用于治疗这些肿瘤。CAR-T细胞无疑是最有希望治愈消化系统肿瘤的手段之一。