[发明专利]一种恶性神经鞘瘤异种移植小鼠模型的构建方法及其应用

说明书

本发明提供一种恶性神经鞘瘤异种移植小鼠模型的构建方法及应用，所述方法包括先采集恶性神经鞘瘤患者肿瘤组织块，再在无菌条件下将新鲜的患者肿瘤组织块异种皮下移植进免疫缺陷小鼠体内，所述异种皮下移植包括选用年龄在2～6周的免疫缺陷小鼠，小鼠性别与患者性别保持一致，将采集到的新鲜的患者肿瘤组织块浸泡在含胎牛血清的无菌孵育液中，小鼠麻醉后固定，将患者肿瘤组织块植入小鼠的皮下，缝合切口，饲养小鼠使得其体内肿瘤生长。本发明还包括将新鲜的患者肿瘤组织块异种原位移植进免疫缺陷小鼠体内。本发明使用异种移植小鼠代替临床患者进行不同组合药物筛选，从而选择最合适的药物，大大提高有效性并降低药物副作用。

技术领域

本发明涉及肿瘤移植小鼠模型的建立领域，具体涉及一种恶性神经鞘瘤异种移植小鼠模型的构建方法及其应用。

背景技术

恶性神经鞘瘤亦称为神经肉瘤，来源于周围神经鞘，由恶性神经母细胞组成，多由神经纤维瘤或神经鞘瘤恶变而来。其恶性程度高，易发生肺转移，致残率与死亡率极高，预后差。恶性神经鞘瘤为社会乃至国家带来了沉重的经济负担，带来了更大的社会问题。因为恶性神经鞘瘤异质性的存在，既往基于恶性神经鞘瘤细胞系的基础研究结果很少可以在临床恶性神经鞘瘤患者体内得到重现，加上疾病发病率低，就导致了临床恶性神经鞘瘤诊治水平的滞后。

发明专利申请CN201710822683.2公开了人NF2^-/-前庭神经鞘瘤施旺细胞系的建立方法及其细胞系。该建立方法包括：A、对肿瘤中的施万细胞进行分离，获得人NF2^-/-的原代施万细胞进行原代培养；B、建立免疫缺陷小鼠坐骨神经人NF2^-/-原代施万细胞移植瘤模型；C、从小鼠坐骨神经上筛选直径大于1cm的移植瘤；D、分离施万细胞，进行原代细胞培养；E、进行连续5代以上传代培养；F、在筛选获得与人NF2^-/-的原代施万细胞、移植瘤原代细胞株细胞形态及主要生物学特征一致，并且能无限传代的NF2^-/-前庭神经施旺细胞。

肿瘤模型是肿瘤研究的重要载体。研究发现，细胞在传代过程中不断适应体外环境，生物学特点与在体肿瘤细胞不符，细胞系异种移植模型与患者本身肿瘤存在较大一致性，这导致抗肿瘤药物临床试验的失败率高。

人源性肿瘤异种移植(patient derived xenograft，PDX)模型是一种体内模型，通过将病人的新鲜肿瘤组织处理后直接移植到免疫缺陷小鼠上，依靠小鼠提供的环境生长与逐步传代，能以小鼠为载体大量扩增患者肿瘤组织。PDX模型有如下优点：首先，其相当于一个模型对应一个病人，能很好地反应不同个体间肿瘤的差异性，相较于传统模型更能够反应临床病人的实际情况；其次，PDX模型可以进行传代，并且传代的肿瘤组织能够和初始肿瘤组织在基因拷贝数、基因突变和表达模式等保持高度的一致性，相当于对于病人肿瘤样本进行了扩增，这就为药物筛查和病人患病机制研究提供了很好的条件；再次，PDX培养的肿瘤块，可以冻存起来复苏之后依然能够构建新的PDX模型，相当于构建了不同病人的肿瘤活体库。

现有的技术主要是通过将新鲜恶性神经鞘瘤组织进行切碎处理或进行细胞匀浆化处理后，在皮下建模。

发明内容

但将新鲜的恶性神经鞘瘤组织匀浆处理后被认为破坏了肿瘤组织本身的微环境，不能良好的保持肿瘤与周围间质与患者的一致性。此外，恶性神经鞘瘤来源于神经鞘，相比于皮下建模，原位建模更能良好模拟肿瘤发生环境。本专利成功建立了组织块移植方式，较好的保留了肿瘤与周边间质的稳定关系，成功建立了恶性神经鞘瘤的皮下建模和神经鞘原位建模，保留了模型肿瘤生长环境与患者肿瘤的一致性。

因此，本发明首先提供一种恶性神经鞘瘤异种移植小鼠模型的构建方法，所述方法包括先采集恶性神经鞘瘤患者肿瘤组织块，再在无菌条件下将新鲜的患者肿瘤组织块异种皮下移植进免疫缺陷小鼠体内，所述异种皮下移植包括选用年龄在2～6周的免疫缺陷小鼠，小鼠性别与患者性别保持一致，将采集到的新鲜的患者肿瘤组织块浸泡在含胎牛血清的无菌孵育液中，小鼠麻醉后固定，将患者肿瘤组织块植入小鼠的皮下，缝合切口，饲养小鼠使得其体内肿瘤生长。