[发明专利]一种通过种子无菌萌发获得空气凤梨种苗的方法

权利要求书

1.一种通过种子无菌萌发获得空气凤梨种苗的方法，其特征在于，包括如下步骤：

1）选择空气凤梨种荚采集的时间：在种荚呈绿色还在纵向伸长生长阶段不宜取材，当种荚长度不再变化，颜色由绿色转向绿褐色，还未炸裂时均可作为外植体材料取材；

2）种荚的消毒灭菌：将种荚放在洗衣粉溶液中浸泡15-20min后流水冲洗1-2h，再用次氯酸钠液消毒10-15min，灭菌水冲洗后吸干表面水分，拿到超净工作台上备用；在超净工作台上进行消毒灭菌：先用70-75%酒精浸泡30s，之后放入0.1%的升汞或0.1%升汞+2-3滴吐温中消毒8-12分钟，无菌水冲洗10次以上，用灭菌吸水纸擦干水分，准备接种；

3）种荚的处理：将上述消毒灭菌后的种荚，用剪刀分别在种荚前段的1/2处剪断，将种子接种在琼脂7%+GA₃3-5.0mg/L的诱导种子萌发培养基上；

4）丛生芽培养：将步骤3）获得的种子接种在1/2MS+GA₃ 3.0 mg/L+6-BA0.2 mg/L +NAA0.5 mg/L或MS+ GA₃ 3.0 mg/L +6-BA0.2 mg/L +NAA0.5 mg/L的培养基上，在无菌自然光下培养28-30天得到丛生芽苗；

5）芽增殖培养：将丛生芽苗分成单株，转入芽增殖培养基中，分别在1500-2000Lx光下培养14h/d，28-30天后统计芽增殖倍数及芽苗生长发育情况；所述芽增殖培养基为MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L；

6）壮苗生根培养：28-30天后再将小芽苗转入壮苗生根培养基，小芽苗长成具有多个茎叶根的正常植株；所述壮苗生根培养基为：MS+6-BA0.1mg/L+IBA0.5mg/L；

7）无菌苗的炼苗与移栽：将步骤6）获得的生长正常健壮的植株瓶口封口膜揭开室内炼苗2-3d，之后取出小植株，洗净植株上附着的培养基，散放于温室大棚的穴盘中，适当遮荫，并及时喷水，保持种苗处在较湿润且透气的状态，直到小植株适应新环境并开始正常生长，20d后统计成活率。