[发明专利]一种通过叶组培快繁空气凤梨种苗的方法

权利要求书

1.一种通过叶组培快繁空气凤梨种苗的方法，其特征在于，包括如下步骤：

1）空气凤梨叶外植体的采取：要求采取生长良好，母株无任何病虫害的完整幼嫩叶；采集叶时应尽量避免在梅雨季节，或天气至少连续放晴3天，选取母株株心第3-6片带叶柄的幼叶，之后将叶剪成1-2cm带叶柄的长条作为叶外植体；

2）叶外植体的消毒灭菌和启动培养：将叶外植体放在洗衣粉溶液中浸泡5-8min，再放入流水中冲洗30-50min，再用1%次氯酸钠+2-3滴吐温配成混合消毒液消毒5-8min，灭菌水冲洗3次后吸干表面水分，拿到超净工作台上，先用70-75%酒精浸泡30s，之后放入0.1%的升汞中消毒8-10min，期间轻轻晃动瓶子，消毒灭菌后无菌水冲洗8-10次，用灭菌吸水纸擦干水分，之后将叶剪成1-2cm带叶柄的长条，平铺接种到启动培养基上，暗培养15-25d得到无菌叶或叶愈伤组织；所述启动培养基为MS+6-BA0.01mg/L+NAA1mg/L+2,4-D3mg/L；

3）叶外植体丛生芽的诱导分化：将步骤2）的无菌叶或叶愈伤组织从启动培养基转接到丛生芽诱导培养基上，在可见光下培养，观察丛生芽生长发育情况；所述丛生芽诱导培养基为MS+6-BA0.5mg/L+KT0.5mg/L+TDZ 0.5 mg/L +NAA0.5mg/L+ CH 300mg/L，

4）芽苗的快繁增殖培养：将步骤3）的丛生芽转接到芽苗快繁分化培养基中，在1500-2000Lx光下培养；所述芽苗快繁分化培养基为MS+6-BA2mg/L+NAA0.2mg/L，

5）壮苗生根培养：根据芽苗的情况将生长状况较好的直接移入壮苗培养基培养，将长势较弱的先在壮苗生根培养基中培养数天，然后再移入壮苗培养基中培养，所述壮苗培养基为MS+6-BA0.5mg/L+IBA0.2mg/L；所述壮苗生根培养基为MS+6-BA0.1mg/L+IBA0.5mg/L；

6）无菌苗的炼苗移栽：将步骤5）生长正常健壮的植株瓶口封口膜揭开室内炼苗2-3d，之后取出小植株，洗净植株上附着的培养基，散放于温室大棚阴凉通风的穴盘中，适当遮荫，并及时少量喷水，保持种苗处在较湿润且透气性良好地环境中，直到小植株适应新环境并开始正常生长。