[发明专利]一种宏基因来源的脂肪酶、编码基因、载体、工程菌及在叶黄素制备中的应用

说明书

本发明一种宏基因来源的脂肪酶、编码基因、载体、工程菌及在叶黄素制备中的应用，属于基因工程技术领域。宏基因来源的脂肪酶HsLIP1的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。编码脂肪酶HsLIP1的基因。基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。一种含有所述基因的重组载体。一种由所述重组载体转化得到的基因工程菌。所述基因在制备重组脂肪酶HsLIP1中的应用。所述的脂肪酶HsLIP1在叶黄素制备中的应用。本发明具有以下优点：脂肪酶HsLIP1易于原核表达，可以采用重组载体、菌株及制备方法高效生产本发明脂肪酶；而且，本发明酶的制备方法简便高效，易于大量表达，适于工业化生产。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种宏基因来源的脂肪酶、编码基因、载体、工程菌及在叶黄素制备中的应用。

背景技术

叶黄素属于类胡萝卜素，包含着多个共轭双键，这些共轭双键不仅赋予了颜色特征，也使其在疾病防治中具有较强的抗氧化功能，如阻止或预防像癌症、动脉硬化、白内障、色斑退化及其它类疾病。目前大规模生产而得到大量叶黄素晶体的方法是从天然资源中提取、分离和纯化得到。植物中的叶黄素类往往是与一些C12-C18长链脂肪酸如肉豆蔻酸、油酸、亚油酸和棕榈酸等酯化形成单酯或双酯的形式存在。目前运用最多的方法是利用强碱皂解叶黄素酯，再重结晶得到叶黄素。然而该方法有以下几个缺点：用到大量的强碱；过程中产生大量的废水；使用到一些有毒的有机溶剂；叶黄素的收率较低。

脂肪酶(triacylglycerol acylhydrolase，EC 3.1.1.3)是一类特殊的酯键水解酶，被定义为能够水解长链脂肪酸酯的酶，广泛存在于各种动物、植物和微生物(包括霉菌、酵母及细菌)中，微生物是目前工业脂肪酶的主要来源。利用脂肪酶在双相系统中(即油-水界面)能催化酯键的水解这一特性将叶黄素脂肪酸脂(叶黄素酯)水解释放叶黄素晶体。脂肪酶水解条件温和，效率高，最低限度的使用有机溶剂，精制步骤简洁，因此该酶在制备叶黄素晶体领域具备广阔的应用空间。

宏基因组学分析不需要对环境的所有微生物进行培养，它可以直接通过对环境细胞进行裂解，然后从基质和细胞碎片中分离回收DNA，以此分析微生物群落的组成和结构，使得原本超过99％的不可培养微生物基因资源的研究和开发成为了现实，极大限度地开发环境微生物资源的潜能。

发明内容

本发明的目的在于公开了一种宏基因来源的脂肪酶、编码基因、载体、工程菌及在叶黄素制备中的应用。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

一种宏基因来源的脂肪酶HsLIP1，其中，所述宏基因来源的脂肪酶HsLIP1的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

一种编码上述技术方案所述脂肪酶HsLIP1的基因。

如上述技术方案所述的基因，其中，所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

一种含有上述技术方案所述基因的重组载体。

根据上述技术方案所述的重组载体，其中，所述重组载体是由编码HsLIP1的基因与pET-28a载体进行粘性互补连接得到。

一种由上述技术方案所述重组载体转化得到的基因工程菌。

根据上述技术方案所述的基因工程菌，其中，所述基因工程菌是由所述的重组质粒转化至E.coli BL21感受态细胞中得到。

上述技术方案所述的基因在制备重组脂肪酶HsLIP1中的应用。

上述技术方案所述的脂肪酶HsLIP1在叶黄素制备中的应用，其中，脂肪酶HsLIP1在制备叶黄素中的应用是指脂肪酶HsLIP1在催化叶黄素浸膏底物的水解释放叶黄素的反应中的应用。本技术方案中叶黄素浸膏底物含叶黄素脂肪酸酯。