[发明专利]一种含细胞提取液的护肤精华液及该细胞提取液的制备方法在审

申请号：	201910904358.X	申请日：	2019-09-24
公开（公告）号：	CN110507600A	公开（公告）日：	2019-11-29
发明（设计）人：	刘海英;齐智;巩俊廷;孟丹丹	申请（专利权）人：	山东甲骨文生物科技有限公司
主分类号：	A61K8/99	分类号：	A61K8/99;A61Q19/00;A61Q19/02
代理公司：	11797 北京专赢专利代理有限公司	代理人：	李斌<国际申请>=<国际公布>=<进入国
地址：	255300 山东省淄博市***	国省代码：	山东;37
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摘要：
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【权利要求书】：

1.一种含细胞提取液的护肤精华液，其特征在于，包括以下按照质量百分比的原料：甘油2-11%、1,3-丁二醇2-11%、山梨醇2-11%、汉生胶0.01-0.1%、卡波姆0.05-0.5%、银耳多糖1-5%、芦荟提取物1-11%、三乙醇胺0.01-0.5%、维生素E 0.01-0.5%、碘丙炔醇丁基氨甲酸酯0.1-0.5%、细胞提取液10-20%、纯水60-75%。

2.根据权利要求1所述的含细胞提取液的护肤精华液，其特征在于，包括以下按照质量百分比的原料：甘油3-10%、1,3-丁二醇3-10%、山梨醇3-10%、汉生胶0.02-0.05%、卡波姆0.1-0.2%、银耳多糖1.5-4%、芦荟提取物2-10%、三乙醇胺0.1-0.4%、维生素E 0.1-0.4%、碘丙炔醇丁基氨甲酸酯0.15-0.4%、细胞提取液12-18%、纯水65-70%。

3.根据权利要求2所述的含细胞提取液的护肤精华液，其特征在于，包括以下按照质量百分比的原料：甘油5%、1,3-丁二醇5%、山梨醇4%、汉生胶0.05%、卡波姆0.1%、银耳多糖1.5%、芦荟提取物2%、三乙醇胺0.1%、维生素E 0.1%、碘丙炔醇丁基氨甲酸酯0.15%、细胞提取液15%、纯水67%。

4.一种如权利要求1-3任一所述含细胞提取液的护肤精华液中的细胞提取液的制备方法，其特征在于，步骤如下：

1）在无菌环境下将去除血管和包膜组织的新鲜动物器官用手术剪将剩余组织剪碎；

2）将剪碎的组织块放入离心管中，用体积两倍的37℃预温的磷酸盐缓冲液+0.25% 胰蛋白酶进行消化2min，液体浑浊时将组织消化液吸出转入另一离心管，加入2%的血清和胰蛋白酶中；未消化完成的组织块继续加入胰蛋白酶消化液进行消化，直至组织块全部消化成组织消化液；

3）组织消化液经细胞筛过滤去除大块细胞团，然后进行一次离心处理；

4）收集的细胞用RPM1640+10% 金源康胎牛血清重悬、计数，转入细胞瓶培养；

5）选取可以传代的细胞进行扩大培养，达到一定数量后用胰蛋白酶消化、收集细胞，开始细胞质提取操作；

6）细胞消化后用磷酸盐缓冲液重悬、计数，洗涤一至二次；

7）取准备好的磷酸盐缓冲液+20%甘油，按照1~5 *107cells/ml的浓度对细胞进行重悬，并放入-80℃冰箱快速冷冻，1h后取出融化，重复三次后，进行二次离心处理，取上清，得细胞精华，即为细胞提取液。

5.根据权利要求4所述的含细胞提取液的护肤精华液中的细胞提取液的制备方法，其特征在于，步骤3）中，所述一次离心处理的转速为1000-2000r/min。

6.根据权利要求4所述的含细胞提取液的护肤精华液中的细胞提取液的制备方法，其特征在于，步骤3）中，所述一次离心处理的时间为2-8min。

7.根据权利要求4所述的含细胞提取液的护肤精华液中的细胞提取液的制备方法，其特征在于，步骤7）中，所述二次离心处理的转速为3000-5000r/min。

8.根据权利要求4所述的含细胞提取液的护肤精华液中的细胞提取液的制备方法，其特征在于，步骤7）中，所述二次离心处理的时间为2-8min。