[发明专利]一种快速检测活动性结核的试剂盒

说明书

本发明属于检测领域，具体涉及一种快速检测活动性结核的试剂盒，包括刺激蛋白和刺激剂，以刺激蛋白和刺激剂组成的混合刺激物为特异刺激抗原，刺激外周血淋巴细胞产生细胞因子IFN‑γ和IL‑2，通过检测IFN‑γ和IL‑2的分泌浓度，从而达到判断是否为活动性结核的目的。本发明的刺激蛋白包含CFP‑10、ESAT‑6和Rv1985c，刺激剂包括佛波醇酯类多克隆刺激剂和离子霉素。其中刺激蛋白可以刺激淋巴细胞中结核特异性的效应T细胞分泌细胞因子，而刺激剂则可刺激活化的淋巴细胞加强合成和分泌细胞因子的能力。本发明可以使检测结果的特异性大幅提升，更准确的判断是否为活动性结核。

技术领域

本发明属于检测领域，具体涉及一种快速检测活动性结核的试剂盒。

背景技术

结核病是一种常见的由结核分枝杆菌引起的慢性传染病，可侵及许多脏器，以肺部结核感染最为常见。目前全球有近1/3的人感染结核杆菌，统计数据表明在2013年有150万人死于结核病，900万新发病例，结核病已成为全世界成人因传染病而死亡的主要疾病之一。中国是全球22个结核病高负担国家之一，活动性肺结核病人数居世界第二位。结核病的传染主要是发生在病人未被发现并进行治疗之前，1名结核病患者一年中通过密切接触可传染多达10-15人。结核病的传播方式为经呼吸道传播，在肺结核病人的肺中有大量的结核杆菌，如果他对着健康人群咳嗽或打喷嚏的话就很有可能将病菌传播给健康人。而在未发现病患前，病人未采取任何预防手段，在与家庭成员、同事、同学等密切接触的过程中，接触者就容易被结核菌感染。现阶段结核病的主要治疗方法主为药物治疗，但是这样的治疗不能够完全阻止结核病的传播。接种卡介苗(BCG)是目前国际公认的最有效预防结核病的免疫方法，中国的计划免疫接种程序中规定新生儿须接种卡介苗，但是其保护效率也并未达到100％，因此，预防结核病的首要措施是尽早发现隐藏在人群中的新发病人。

活动性结核是指患有结核病，证明有结核分枝杆菌排出，病灶属于活动期，胸片上常有斑片状阴影或是结核空洞，或者播散病灶，说明结核分枝杆菌繁殖活跃，毒力强。活动性结核患者是结核病的主要传染源，如不能及时诊断治疗，会造成结核病的大范围传播，快速准确的检出活动性结核患者是降低结核病发病率及病死率的关键。目前临床常用于活动性结核诊断的方法中，影像学方法特异性差，诊断过程与医生的经验紧密相关，诊断结果带有较强的主观性；痰培养方法是结核诊断金标准，但敏感性低，且耗时长(2-8周)，不利于结核的早期诊断；抗酸染色法敏感性仅有20-30％；分子诊断方法(如PCR)重复性差，且操作繁琐，对实验室环境有一定的要求；结核菌素试验(TST)易受卡介苗(BCG)接种的影响，造成检测结果的假阳性。近年来出现了以T细胞为基础的γ-干扰素释放试验，但是该方法仅能判断患者是否感染了(过)结核分支杆菌，无法判断是否为活动性结核。

结核分枝杆菌是一种典型的胞内感染菌，人体对其免疫机制主要是以T细胞为主的细胞免疫。结核分枝杆菌侵入人体后，在机体免疫力低下的时候，巨噬细胞不能防止所吞噬的结核分枝杆菌生长，但可将吞噬的结核分枝杆菌带到他处，提呈抗原，此时结核分枝杆菌大量繁殖，使周围T淋巴细胞致敏，致敏的T淋巴细胞可产生多种细胞因子(如INF-γ、IL-2与TNF-α等)，这些细胞因子共同作用，杀死病灶中的结核分枝杆菌。γ-干扰素释放试验正是基于利用这一特性，利用结核分枝杆菌表达的抗原刺激外周血单核细胞产生γ干扰素。现有γ-干扰素释放试验检测试剂盒使用的刺激抗原为CFP-10与ESAT-6，CFP-10与ESAT-6为结核分枝杆菌RD区表达的蛋白，因此具有结核特异性。但现有γ-干扰素释放试验的试剂盒特异性不高，仅为70％-85％左右，仍有进一步提升的可能与需求。

发明内容

为了克服上述现有技术的不足，本发明提出了一种快速检测活动性结核的试剂盒，通过该试剂盒可以使检测结果的特异性大幅提升，更准确的判断是否为活动性结核。

为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：

本发明提出一种快速检测活动性结核的试剂盒，该试剂盒包括：