[发明专利]一种从海葡萄中酶法制备活性β-1;3-木寡糖的方法

权利要求书

1.一种从海葡萄中酶法制备活性β-1，3-木寡糖的方法，其特征在于：包括如下步骤：

(1)从海葡萄中提取β-1，3-木聚糖；

(2)获得重组β-1，3-木聚糖酶；

(3)以上述重组β-1，3-木聚糖酶水解步骤(1)所得的物料，以获得所述活性β-1，3-木寡糖，具体包括：

a、将步骤(1)所得的物料加入到pH为6.9-7.2的Tris-HCl缓冲液，制成浓度为0.8-1.2wt％的β-1，3-木聚糖溶液；

b、将上述β-1，3-木聚糖溶液与适量上述重组β-1，3-木聚糖酶混合后，于44-46℃反应20-30h，接着置于95-100℃加热4-6min，使上述重组β-1，3-木聚糖酶失活；

c、将步骤b所得的物料于11000-13000rpm离心4-6min，所得上清液即为所述活性β-1，3-木寡糖。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(1)包括：

a、将海葡萄粉与适量NaOH溶液混合，边搅拌边加热并充分煮沸25-35min；

b、将步骤a所得物料以3500-4500rpm离心15-25min，将所得第一沉淀用蒸馏水充分洗涤；

c、在步骤b所得的物料中加入适量H₂SO₄溶液，以3500-4500rpm离心15-25min，获得第二沉淀；

d、在上述第二沉淀中加入适量NaOH溶液，冰浴条件下搅拌提糖1.5-2h，然后将所得物料进行离心，得上清液；

e、将该上清液与无水乙醇以1∶3-5的体积比混合，于3-5℃静置10-12h，经固液分离获得第三沉淀；

f、向上述第三沉淀中加入适量高氯酸钠溶液，边搅拌边脱色1.5-2.5h，再用蒸馏水充分洗涤，得第四沉淀；

g、将上述第四沉淀于9500-12000rpm离心12-20min，获得第五沉淀；

h、将上述第五沉淀用乙酸溶液充分吹洗，再用蒸馏水充分洗涤，获得β-1，3-木聚糖。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于：所述步骤(1)的步骤a中的海葡萄粉为经过预处理的海葡萄粉，该预处理的过程包括：

a1、将海葡萄粉与纯净水混合后，于亚临界水状态下萃取5min～20min，冷却至室温后离心收集上清液，然后冷冻干燥。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于：所述预处理的过程还包括：

a2、在室温下将蒸馏水13-14重量份、盐酸0.1-0.2重量份、葡萄糖4-5重量份、无水乙醇9-12重量份和正硅酸乙酯50-60重量份依次加入到反应容器中，迅速搅拌4-6min，液体依次经历透明-混浊-透明状变化，用室温水冷却降温，充分去除乙醇，以形成预水解凝胶；

a3、向预水解凝胶中加入16-17重量份的所述冷冻干燥后的物料，并用碱调节pH至5.4-5.6，低速搅拌25-35min后，于3-5℃静置45-50h，获得湿胶；

a4、将上述湿胶研磨粉碎，用蒸馏水充分洗涤以去除其中的葡萄糖，再经过滤、干燥和研磨粉碎过筛，即成。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(1)为：从海葡萄中提取β-1，3-木聚糖，取其中适量β-1，3-木聚糖制成羟基醇β-1，3-木聚糖，再与剩下的β-1，3-木聚糖混合。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于：所述羟基醇β-1，3-木聚糖占步骤(1)所得的物料的5-10wt％。

7.如权利要求5或6所述的方法，其特征在于：所述羟基醇β-1，3-木聚糖的制备方法包括：

I、将β-1，3-木聚糖溶解于NaOH溶液中，再加入适量二氯乙醇，冰浴搅拌0.8-1.5h，再于室温下搅拌20-25h；

II、在步骤I所得的物料中加入冰醋酸，于冰浴下中和，然后进行透析；

III、将步骤III所得的物料加热搅拌浓缩，再经冷冻干燥，即得所述羟基醇β-1，3-木聚糖。