[发明专利]一种检测由6个CD36突变基因所导致GPⅣ缺失的基因分型试剂盒

说明书

本发明涉及检测由6个CD36突变基因导致GPⅣ缺失个体的基因分型试剂盒，所述的6个CD36突变基因的位点分别为：C275T(Thr92Met)、730GA(Asp244Asn)、Exon‑10+2TG(Change in splicing site)、1123CT(Pro375Ser)、1229TC(Ile410Thr)和1332ints TGAT(frameshift at AA 445)。本发明提供了一种简便快捷和高通量的实验检测方法，该试剂盒适合于由6个CD36突变基因所导致的GPⅣ缺失个体的分型检测和鉴定，抗‑GPⅣ血小板同种免疫疾病的辅助诊断检测。

技术领域

本发明属于生物医学检测领域，特别是涉及一种由CD36突变基因导致人类GPⅣ缺失的基因分型试剂盒。

背景技术

血小板糖蛋白Ⅳ(GPⅣ)，又名CD36、GP88、GPIIIb FAT或SCARB3，属于B类清道夫受体跨膜糖蛋白家族。该蛋白分子能被广泛糖基化，分子质量约为88000D。人类GPⅣ蛋白由472个氨基酸组成。GPⅣ蛋白在人体内广泛分布于多种细胞和组织中，包括血小板、单核/巨噬细胞、微血管内皮细胞、大脑小胶质细胞、星形胶质细胞、心肌和骨骼肌、脂肪细胞、树突状细胞、视网膜上皮细胞和乳腺及肾脏组织。其主要的功能包括作为凝血酶受体，胶原蛋白受体，长链脂肪酸受体等；还参与诱导细胞凋亡，去除血浆中的氧化低密度脂蛋白，增强异常形态红细胞的黏附等功能，在多种生理病理过程中发挥了重要的作用，大量的研究已证明：GPⅣ涉及止血、血栓、血小板同种免疫性疾病、高胆固醇血症、肥胖症、外周动脉粥样硬化、动脉高血压、心肌病、糖尿病、疟疾、早老年型痴呆(阿尔茨海默病)、癌症等疾病的形成。

部分个体在血小板或和单核细胞可出现GPⅣ缺失，按表现型GPⅣ缺失可分为2类：I型缺失，血小板和单核细胞上均不表达GPⅣ；II型缺失，GPⅣ仅在血小板不表达，但在单核细胞表达。编码GPⅣ的CD36基因变异，是导致人类GPⅣ抗原缺失的重要原因。编码GPⅣ的CD36基因位于第7号染色体的q11.2，有15个外显子，长度超过32000bp。GPⅣ蛋白编码区位于外显子3至外显子14，，由于人群多态性原因，不同人群中导致GPⅣ缺失的基因突变有所不同，如在日本人以268CT、329-330delAC等突变多见(见文献Yanai H,Chiba H,FujiwaraH,et al.Phenotype-genotype correlation in GPⅣdeficiency types I andII.Thromb Haemost,2000,84(3):436-441.)。而本申请人在中国广西人群中发现了6个导致GPⅣ缺失的新突变基因，分别为C275T(Thr92Met)、730GA(Asp244Asn)、Exon-10+2TG(Change in splicing site)、1123CT(Pro375Ser)、1229TC(Ile410Thr)和1332intsTGAT(frameshift at AA 445)。在人群中开展由这6个CD36突变基因所导致GPⅣ缺失的多态性的检测和筛查，将有助于全面检测人群中这6个GPⅣ突变基因所导致的GPⅣ缺失个体的分布特点和对个体生理及病理功能的影响，掌握人群中导致GPⅣ缺失的基因多态性情况，及遗传学特征。

为检查人群中所存在的GPIV缺失个体，目前文献报道中大多以血清学或基因测序的方式对GPⅣ缺失个体进行基因分型检测，也有部分报道以序列特异性引物-聚合酶链反应(PCR-SSP)、限制性片段长度多态性聚合酶链反应(PCR-RFLP)、实时荧光定量PCR TaqMan探针技术，通过分析基因突变的存在以及与野生型的对比情况，来检测GPⅣ缺失个体的发生，所采用的检测技术繁琐而且是非特异性，不能达到对由特异性的突变基因所导致的GPIV缺失个体进行特异性的、高通量的筛查和鉴定的目的，更不能对本发明中所描述的发生在人群中的6个CD36突变基因所导致的GPⅣ缺失个体做针对性的、群体性的正确检测、分析和研究，因此，本发明旨在发明一种由特定的CD36突变基因所导致GPⅣ缺失个体的基因分型试剂盒，对所发现的6个CD36突变基因导致GPⅣ缺失个体做特异性、高通量地检测和鉴定。

发明内容