[发明专利]一种检测外泌体的方法

权利要求书

1.一种检测外泌体的方法，其特征在于：包括如下步骤：

S1、采集外泌体的样本，提取细胞内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体，经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中，通过离心的方式去除胞外基质中的细胞杂质，得到外泌体和分析液，提取分析液存储在试管内，用于对分析液的检测，再提取外泌体储存在培养基内，用于对外泌体的检测；

S2、外泌体的预处理，通过利用不同截留的相对分子质量(MWCO)的超滤膜对培养基内的外泌体进行选择性分离，从而获得预处理后的外泌体；

S3、外泌体的处理，将分离后的外泌体的表面，用包被抗标记物抗体的磁珠与外泌体囊泡孵育后结合，即可将外泌体吸附并分离出来，从而去除外泌体内的杂质，再取出上清后，进行超声破碎处理；

S4、外泌体的检测，超声破碎后的外泌体，首先与核酸适体进行特异性结合，再将核酸适体的嵌合体修饰到外泌体表面，而嵌合体部分则作为开关引发两条单链反应，获得纳米组装体，再由动态光散射对纳米组装体上的靶细胞所分泌的外泌体表面进行原位组装，再对形成原位组装的外泌体配合透射电子显微镜进行检测，达到外泌体的检测效果。

2.根据权利要求1所述的一种检测外泌体的方法，其特征在于：步骤S1中，所述在外泌体储存在培养基内之前，通过电镜对外泌体进行观察。

3.根据权利要求1所述的一种检测外泌体的方法，其特征在于：步骤S3中，所述离心去除胞外基质中细胞杂质的离心时间为10-12min，去除大直径多囊泡体的离心时间为35-45min，并且离心旋转为8000r/min-12000r/min。

4.根据权利要求1所述的一种检测外泌体的方法，其特征在于：步骤S3中，所述上清与含1％脱脂奶的PBS按照体积比1:29进行稀释，然后进行超声破碎，所述超声破碎条件为间隔5s开关一次，至少60循环。

5.根据权利要求1所述的一种检测外泌体的方法，其特征在于：步骤S4中，所述核酸适体的嵌合体在温度为10-15℃的环境下修饰到外泌体表面。