[发明专利]一种适用于南方根结线虫无菌培养的消毒方法

说明书

本发明公开了一种适用于南方根结线虫无菌培养的消毒方法。所述方法包括先后采用酒精和硫酸链霉素浸泡根结线虫的步骤；所述酒精的体积分数为75±5％；所述硫酸链霉素的水溶液的质量浓度为0.6～0.9％。本发明方法采用的酒精、硫酸链霉素等方便购买，成本低；本发明方法操作简便，不会造成污染，效果显著。

技术领域

本发明涉及一种适用于南方根结线虫无菌培养的消毒方法，属于微生物培养技术领域。

背景技术

根结线虫(Meloidogyne spp.)为最主要植物病原线虫，其寄主广泛，常见寄主多达2000余种，遍及粮食和经济作物，以及多种花卉、果树、中药材等，特别是茄科、葫芦科和十字花科植物根结线虫病尤为严重，一般造成减产10％～20％，严重的可达75％以上。由于根结线虫的危害严重，对根结线虫病的研究就显得十分重要。

目前，研究根结线虫和植物互作主要通过两种手段：一种是在自然的生长状态下，根结线虫寄生在以土壤或基质栽培的作物中。如需观察植物与根结线虫的互作情况，首先需要洗根，耗费人工。另一种是根结线虫寄生在培养基培养的无菌植株根系中，培养基透明方便研究观察，根系易于清洗，此方法实施过程中，根结线虫消毒是一大难题，极易引入污染。因此，需要提供一种新的根结线虫的消毒方法解决这一难题。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于南方根结线虫无菌培养的消毒方法，本发明消毒方法方便，效果良好，操作简便，成本低。

本发明所提供的适用于根结线虫无菌培养的消毒方法，包括先后采用酒精和硫酸链霉素浸泡根结线虫的步骤。

上述的消毒方法中，所述酒精的体积分数为75±5％。

上述的消毒方法中，所述酒精的用量为：1mL所述酒精：500～550条所述根结线虫；

将所述根结线虫与所述酒精混合均匀后静置4.5～5h。

上述的消毒方法中，于25～27℃的恒温箱中静置。

上述的消毒方法中，采用所述酒精进行消毒之前，优选采用蒸馏水洗涤所述根结线虫，即加入蒸馏水后进行离心，去除上清夜。

上述的消毒方法中，采用所述硫酸链霉素的水溶液浸泡所述根结线虫；所述酒精消毒结束后，经离心去除上清液。

上述的消毒方法中，所述硫酸链霉素的水溶液的质量浓度可为0.6～0.9％，优选0.7％。

上述的消毒方法中，所述硫酸链霉素的用量为：1mL所述硫酸链霉素的水溶液：500～550条所述根结线虫；

将所述根结线虫与所述硫酸链霉素混合均匀后静置4.5～5h。

上述的消毒方法中，于25～27℃的恒温箱中静置。

上述的消毒方法中，经所述硫酸链霉素消毒后，采用无菌蒸馏水重复清洗多次：离心后去除上清液，加入无菌蒸馏水，离心后去除上清液，反复多次上述无菌蒸馏水的洗涤。

经洗涤后的根结线虫再次加入至无菌蒸馏水中，悬浮，即可接种于无菌培养的植物根系中，如黄瓜、番茄等蔬菜作物。

本发明方法适用于南方根结线虫的消毒。

本发明方法具有如下优点：

本发明方法采用的酒精、硫酸链霉素等方便购买，成本低；本发明方法操作简便，不会造成污染，效果显著。

附图说明

图1为实施例1中采用酒精和硫酸链霉素消毒的条件下接种根结线虫后的植株污染情况。

图2为对比例1中采用次氯酸钠消毒的条件下接种根结线虫后的植株污染情况。