[发明专利]一种细胞共培养的装置及牛肌细胞与脂肪细胞的共培养方法

权利要求书

1.一种细胞共培养装置，是由皿体（1）和皿盖（2）构成，其特征在于：所述皿体（1）为上开口的中空结构，皿体（1）开口处设有皿盖（2），皿体（1）的内部设有隔离圈（4），隔离圈（4）为上下开口的中空结构，隔离圈（4）将皿体（1）的内部分割为区域Ⅰ和区域Ⅱ，隔离圈（4）的内部为区域Ⅰ，隔离圈（4）与皿体（1）之间为区域Ⅱ，隔离圈（4）的内部设有爬片（3）。

2.根据权利要求1所述的一种细胞共培养装置，其特征在于所述的皿体（1）和隔离圈（4）均为圆柱体。

3.根据权利要求2所述的一种细胞共培养装置，其特征在于所述的皿体（1）的直径60mm，隔离圈（4）的直径为35mm，爬片（3）为24mm*24mm的盖玻片。

4.利用权利要求1所述的装置共培养牛肌细胞与脂肪细胞的方法，其操作步骤如下：

（1）在无菌条件下，分别取牛背最长肌和肾周脂肪组织，切除可见的血管和结缔组织，用5%～10%质量百分比双抗的1xPBS冲洗，然后将组织剪成1mm³大小的小块，备用；

（2）分别在（1）步骤中剪碎的牛背最长肌肌肉组织加入0.25％的Ⅱ型胶原酶/0.1%的Ⅱ型中性蛋白酶消化液，在（1）步骤中剪碎的肾周脂肪组织中加入0.25％的Ⅰ型胶原酶消化液，恒温振荡水浴锅37℃消化直至细浆状，得到细浆液；

（3）将（2）步骤制得的细浆液与等体积有血清培养液混合，终止消化，然后将细胞悬液通过80μm细胞筛过滤，经1200rpm/min离心10分钟，弃上清液以获得细胞沉淀，再加入血清培养液使细胞密度1×10⁵～2×10⁵/ml，吹打混匀，制成细胞悬液；

（4）将（3）步骤制得的细胞悬液接种于权利要求1所述的细胞共培养装置中，加入含10%胎牛血清、1%双抗的DMEM/F12完全培养基，在区域Ⅰ接种一种细胞，在区域Ⅱ接种另一种细胞或按照1：1的比例接种两种细胞混合共培养，并置于37℃、5%CO₂培养箱培养，待细胞贴壁后将隔离圈（4）取出，即完成牛肌细胞与脂肪细胞的共培养。

5.根据权利要求1所述的共培养牛肌细胞与脂肪细胞的方法，其特征在于步骤（3）中的脂肪细胞有血清培养液配方为含10%胎牛血清、1%双抗的DMEM/F12培养基。

6.根据权利要求1所述的共培养牛肌细胞与脂肪细胞的方法，其特征在于步骤（3）中的肌细胞有血清培养液配方为含20%胎牛血清、1%双抗的DMEM/F12培养基。