[发明专利]一种鲜榨苹果汁的鉴伪方法

权利要求书

1.一种鲜榨苹果汁的鉴伪方法，其特征在于所述方法由下述步骤组成：

(1)提取DNA

将待测样品用组织裂解液与RNase裂解后，除去杂质，再用纳米硅基磁珠吸附DNA，最后用洗脱液洗脱磁珠吸附的DNA；

(2)掺假鉴别

以步骤(1)提取的DNA为模板，加入特异性引物进行常规PCR扩增，其中特异性引物的上游引物为：5’-AACGGCTACCACATCCAAGG-3’，下游引物为：5’-ACCAGACTTGCCCTCCAATG-3’；扩增产物用2％琼脂糖凝胶电泳分析，观察电泳结果是否出现164bp的条带；若电泳结果未出现该条带，说明样品不含苹果成分，为掺假样品；若电泳结果出现该条带，将测序结果输入NCBI查询与登录号为DQ341382.1的苹果18SrRNA的重复率，当重复率小于90％，说明样品不含苹果成分，为掺假样品，当重复率为90％以上，说明样品含有苹果成分；

(3)确定掺假量

(i)建立鲜榨苹果汁掺假线性回归方程

将鲜榨苹果汁进行0.5％～70％的掺假，然后按照步骤(1)的方法提取各个掺假样品的DNA，分别以提取的DNA为模板，进行荧光定量PCR扩增，得到对应的Ct值，建立掺假量与Ct值的线性回归方程；

(ii)待测样品中鲜榨苹果汁含量测定

对步骤(2)中经过琼脂糖凝胶电泳分析确认含有苹果成分的样品，以该样品提取的DNA为模板进行荧光定量PCR扩增，得到对应的Ct值，将该Ct值代入上述掺假量与Ct值的线性回归方程中，经计算得到鲜榨苹果汁含量。

2.根据权利要求1所述的鲜榨苹果汁的鉴伪方法，其特征在于：步骤(1)中，所述的组织裂解液为Plantzol或CTAB裂解液。

3.根据权利要求1所述的鲜榨苹果汁的鉴伪方法，其特征在于：步骤(1)中，所述纳米硅基磁珠的添加量为待测样品体积的1.5％～2.5％。

4.根据权利要求1所述的鲜榨苹果汁的鉴伪方法，其特征在于：步骤(1)中，用纳米硅基磁珠吸附DNA的时间为1～3min。

5.根据权利要求1所述的鲜榨苹果汁的鉴伪方法，其特征在于：步骤(2)中，常规PCR扩增反应体系为：12.5μL 2×EasyTaq PCR SuperMix(+Dye)，lμL 10μM上游引物水溶液，1μL10μM下游引物水溶液，lμL DAN模板，9.5μL无菌双蒸水；常规PCR扩增反应程序为：预变性：95℃，5min；变性：94℃，30s；55℃退火30s；72℃延伸30s；共35个循环；72℃延伸5min。

6.根据权利要求1所述的鲜榨苹果汁的鉴伪方法，其特征在于：步骤(3)中，荧光定量PCR扩增反应体系为：10μL 2×TransStart Top Green Qpcr superMix(+Dye)，1μL上游引物水溶液，1μL下游引物水溶液，lμL DAN模板，7μL RNase-free water；荧光定量PCR扩增反应程序为：预变性：94℃，30s；变性：94℃，5s；55℃退火10s；72℃延伸15s；共40个循环。