[发明专利]柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实有效部位或成分的制备方法及其在制备药物中的应用

权利要求书

1.柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实有效部位或有效成分的制备方法及其在制备改善睡眠或抗抑郁或改善记忆力减退或治疗阿尔茨海默病或治疗心脑血管系统缺血性疾病药物或保健食品中的应用，其特征在于：柑橘属植物制备的有效部位或有效成分本身是柑橘属植物的花蕾或花提取的挥发油或精油部位及其制备的成分，或柑橘属植物的花蕾或花总提取物及其总提取物上大孔吸附树脂的水洗脱部位及其制备的成分或30％乙醇水洗脱部位及其制备的成分或70％乙醇水洗脱部位及其制备的成分或95％乙醇水洗脱部位及其制备的成分或30％乙醇水洗脱部位和70％乙醇水洗脱部位合并经聚酰胺柱色谱纯化得总含量大于90％的总黄酮类化合物，或新鲜柑橘属植物的花蕾或花低温真空冷冻干燥花蕾或花及其粉末及其所含的成分；柑橘属植物的枝或叶制备的有效部位或有效成分本身是柑橘属植物的枝或叶提取的挥发油或精油部位及其制备的成分，或柑橘属植物的枝或叶总提取物及其总提取物上大孔吸附树脂的水洗脱部位及其制备的成分或30％乙醇水洗脱部位及其制备的成分或70％乙醇水洗脱部位及其制备的成分或95％乙醇水洗脱部位及其制备的成分或30％乙醇水洗脱部位和70％乙醇水洗脱部位合并经聚酰胺柱色谱纯化得总含量大于90％的总黄酮类化合物，或新鲜柑橘属植物的枝或叶冷冻干燥枝或叶及其粉末及其所含的成分；柑橘属植物的果实制备的有效部位或有效成分本身是柑橘属植物的果实提取的挥发油或精油部位及其制备的成分，或柑橘属植物的果实总提取物及其总提取物上大孔吸附树脂的水洗脱部位及其制备的成分或30％乙醇水洗脱部位及其制备的成分或70％乙醇水洗脱部位及其制备的成分或95％乙醇水洗脱部位及其制备的成分或30％乙醇水洗脱部位和70％乙醇水洗脱部位合并经聚酰胺柱色谱纯化得总含量大于90％的总黄酮类化合物，或新鲜柑橘属植物的果实冷冻干燥的果实及其粉末及其所含的成分。

2.柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实有效部位或有效成分的制备方法及其在制备改善睡眠或抗抑郁或改善记忆力减退或治疗阿尔茨海默病或治疗心脑血管系统缺血性疾病药物或保健食品中的应用，其特征在于，柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实有效部位或有效成分的制备方法如下：

(一)柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实药材，用0-100％乙醇浸泡0.5-2小时，4-15倍量溶剂(主要用0-100％乙醇水为溶剂)，可选用微波辅助提取+水蒸气蒸馏法+溶剂提取法(主要用0-100％乙醇水为溶剂)﹑或超声波辅助提取+水蒸气蒸馏法+溶剂提取法(主要用0-100％乙醇水为溶剂)﹑或生物发酵+水蒸气蒸馏法+溶剂提取法(主要用0-100％乙醇水为溶剂)﹑或水蒸气蒸馏法+生物发酵+溶剂提取法(主要用0-100％乙醇水为溶剂)，提取2-4次，每次1-6小时，过滤，合并滤液；上述滤液直接上大孔吸附树脂或45-80℃减压浓缩得浸膏并用水稀释至0.6-1.5g生药材/ml上大孔吸附树脂AB-8型或D-101型或HPD-400或其它各种型号大孔吸附树脂富集，依次用水洗脱、30％乙醇水洗脱、70％乙醇水洗脱、95％乙醇水洗脱，得水洗脱部位、30％乙醇水洗脱部位、70％乙醇水洗脱部位、95％乙醇水洗脱部位，各洗脱部位在45-80℃减压回收溶剂至乙醇适量浓度，用冷冻干燥法或喷雾干燥进行干燥，收集冻干粉或喷雾干燥粉，即得；

(二)优选新鲜佛手花及花蕾或新鲜佛手枝叶或佛手果实(佛手柑)，用水浸泡0.5-2小时，6-15倍量水作为溶剂水蒸气蒸馏提取3-6小时，得新鲜佛手花及花蕾或新鲜佛手枝叶或佛手果实(佛手柑)挥发油或精油部位；将水蒸气蒸馏提取后的水提液过滤，将上述新鲜佛手花及花蕾或新鲜佛手枝叶或佛手果实(佛手柑)药渣继续用水煎煮1-3次或相应溶剂(主要用0-100％乙醇水为溶剂)提取1-3次，合并上述水提液直接上大孔吸附树脂或45-80℃减压浓缩得浸膏(0.6-1.5g生药材/ml)后再上大孔吸附树脂AB-8型或D-101型或HPD-400或其它各种型号大孔吸附树脂富集，依次用水洗脱、30％乙醇水洗脱、70％乙醇水洗脱、95％乙醇水洗脱，得水洗脱部位、30％乙醇水洗脱部位、70％乙醇水洗脱部位、95％乙醇水洗脱部位，各洗脱部位在45-80℃减压回收溶剂至乙醇适量浓度，用冷冻干燥法或喷雾干燥进行干燥，收集冻干粉或喷雾干燥粉，即得；

(三)优选新鲜脐橙花及花蕾或新鲜脐橙枝叶或脐橙果实，用水浸泡0.5-2小时，6-15倍量水作为溶剂水蒸气蒸馏提取3-6小时，得新鲜脐橙花及花蕾或新鲜脐橙枝叶或脐橙果实挥发油或精油部位；将水蒸气蒸馏提取后的水提液过滤，将上述新鲜脐橙花及花蕾或新鲜脐橙枝叶或脐橙果实药渣继续用水煎煮1-3次或相应溶剂(主要用0-100％乙醇水为溶剂)提取1-3次，合并上述水提液直接上大孔吸附树脂或45-80℃减压浓缩得浸膏(0.6-1.5g生药材/ml)后再上大孔吸附树脂AB-8型或D-101型或HPD-400或其它各种型号大孔吸附树脂富集，依次用水洗脱、30％乙醇水洗脱、70％乙醇水洗脱、95％乙醇水洗脱，得水洗脱部位、30％乙醇水洗脱部位、70％乙醇水洗脱部位、95％乙醇水洗脱部位，各洗脱部位在45-80℃减压回收溶剂至乙醇适量浓度，用冷冻干燥法或喷雾干燥进行干燥，收集冻干粉或喷雾干燥粉，即得；

(四)优选新鲜酸橙花及花蕾或新鲜酸橙枝叶或酸橙果实(主要为枳实或枳壳)，用水浸泡0.5-2小时，6-15倍量水作为溶剂水蒸气蒸馏提取3-6小时，得新鲜酸橙花及花蕾或新鲜酸橙枝叶或酸橙果实(主要为枳实或枳壳)挥发油或精油部位；将水蒸气蒸馏提取后的水提液过滤，将上述新鲜酸橙花及花蕾或新鲜酸橙枝叶或酸橙果实(主要为枳实或枳壳)药渣继续用水煎煮1-3次或相应溶剂(主要用0-100％乙醇水为溶剂)提取1-3次，合并上述水提液直接上大孔吸附树脂或45-80℃减压浓缩得浸膏(0.6-1.5g生药材/ml)后再上大孔吸附树脂AB-8型或D-101型或HPD-400或其它各种型号大孔吸附树脂富集，依次用水洗脱、30％乙醇水洗脱、70％乙醇水洗脱、95％乙醇水洗脱，得水洗脱部位、30％乙醇水洗脱部位、70％乙醇水洗脱部位、95％乙醇水洗脱部位，各洗脱部位在45-80℃减压回收溶剂至乙醇适量浓度，用冷冻干燥法或喷雾干燥进行干燥，收集冻干粉或喷雾干燥粉，即得；

(五)优选新鲜代代花的花及花蕾或新鲜代代花的枝叶或代代花的果实，用水浸泡0.5-2小时，6-15倍量水作为溶剂水蒸气蒸馏提取3-6小时，得新鲜代代花的花及花蕾或新鲜代代花的枝叶或代代花的果实挥发油或精油部位；将水蒸气蒸馏提取后的水提液过滤，将上述新鲜代代花的花及花蕾或新鲜代代花的枝叶或代代花的果实药渣继续用水煎煮1-3次或相应溶剂(主要用0-100％乙醇水为溶剂)提取1-3次，合并上述水提液直接上大孔吸附树脂或45-80℃减压浓缩得浸膏(0.6-1.5g生药材/ml)后再上大孔吸附树脂AB-8型或D-101型或HPD-400或其它各种型号大孔吸附树脂富集，依次用水洗脱、30％乙醇水洗脱、70％乙醇水洗脱、95％乙醇水洗脱，得水洗脱部位、30％乙醇水洗脱部位、70％乙醇水洗脱部位、95％乙醇水洗脱部位，各洗脱部位在45-80℃减压回收溶剂至乙醇适量浓度，用冷冻干燥法或喷雾干燥进行干燥，收集冻干粉或喷雾干燥粉，即得；

(六)优选新鲜甜橙花及花蕾或新鲜甜橙枝叶或甜橙果实，用水浸泡0.5-2小时，6-15倍量水作为溶剂水蒸气蒸馏提取3-6小时，得新鲜甜橙花及花蕾或新鲜甜橙枝叶或甜橙果实挥发油或精油部位；将水蒸气蒸馏提取后的水提液过滤，将上述新鲜甜橙花及花蕾或新鲜甜橙枝叶或甜橙果实药渣继续用水煎煮1-3次或相应溶剂(主要用0-100％乙醇水为溶剂)提取1-3次，合并上述水提液直接上大孔吸附树脂或45-80℃减压浓缩得浸膏(0.6-1.5g生药材/ml)后再上大孔吸附树脂AB-8型或D-101型或HPD-400或其它各种型号大孔吸附树脂富集，依次用水洗脱、30％乙醇水洗脱、70％乙醇水洗脱、95％乙醇水洗脱，得水洗脱部位、30％乙醇水洗脱部位、70％乙醇水洗脱部位、95％乙醇水洗脱部位，各洗脱部位在45-80℃减压回收溶剂至乙醇适量浓度，用冷冻干燥法或喷雾干燥进行干燥，收集冻干粉或喷雾干燥粉，即得；

(七)优选橘子皮(陈皮)或枳实或枳壳或青檬或血橙或红葡萄柚或绿葡萄柚或粉葡萄柚或绿桔，用水浸泡0.5-2小时，6-15倍量水作为溶剂水蒸气蒸馏提取3-6小时，得橘子皮(陈皮)或枳实或枳壳或青檬或血橙或红葡萄柚或绿葡萄柚或粉葡萄柚或绿桔挥发油或精油部位；将水蒸气蒸馏提取后的水提液过滤，将上述橘子皮(陈皮)或枳实或枳壳或青檬或血橙或红葡萄柚或绿葡萄柚或粉葡萄柚或绿桔药渣继续用水煎煮1-3次或相应溶剂(主要用0-100％乙醇水为溶剂)提取1-3次，合并上述水提液直接上大孔吸附树脂或45-80℃减压浓缩得浸膏(0.6-1.5g生药材/ml)后再上大孔吸附树脂AB-8型或D-101型或HPD-400或其它各种型号大孔吸附树脂富集，依次用水洗脱、30％乙醇水洗脱、70％乙醇水洗脱、95％乙醇水洗脱，得水洗脱部位、30％乙醇水洗脱部位、70％乙醇水洗脱部位、95％乙醇水洗脱部位，各洗脱部位在45-80℃减压回收溶剂至乙醇适量浓度，用冷冻干燥法或喷雾干燥进行干燥，收集冻干粉或喷雾干燥粉，即得；

(八)柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实挥发油或精油部位提取方法可优选新鲜柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实微波辅助提取或超声波辅助提取+低温真空冷冻抽提+脂肪油热冷萃取技术；

(九)优选上述柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实获得的或所含有的挥发油或精油部位继续应用分馏法、冷冻析晶法、分子蒸馏技术、硅胶柱色谱、聚酰胺柱色谱、ODS-C₁₈柱色谱、葡聚糖凝胶柱色谱和制备高效液相色谱分离得到α-侧柏烯﹑α-蒎烯﹑苯乙醇﹑β-水芹烯﹑桧烯﹑β-蒎烯﹑β-月桂烯﹑苯乙醛﹑A-水芹烯﹑3-蒈烯﹑2-蒈烯﹑对伞花烃﹑(+)-柠檬烯﹑(E)B-罗勒烯(反-β-罗勒烯)﹑β-罗勒烯﹑γ-松油烯(GAMMA-萜品烯)﹑4-(2-甲氨基)乙基-吡啶﹑异松油烯(萜品油烯)﹑芳樟醇﹑(Z)-3,7-二甲基-1,3,6-十八烷三烯﹑2-氨基-苯甲酸甲酯﹑苯乙醇﹑4-萜烯醇(4-松油醇)﹑橙花醇﹑甲位松油醇﹑香茅醛﹑吲哚﹑香叶醇(牻牛儿醇)﹑乙位松油醇﹑5-苯基戊烯﹑乙酸苯乙酯﹑香叶基丙酮﹑乙酸芳樟酯﹑甲酸香叶酯﹑乙酸橙花酯﹑B-榄香烯﹑1-石竹烯﹑ALPHA-律草烯(α-石竹烯)﹑荜澄茄油烯﹑α-金合欢烯(α-芹子烯)﹑橙花叔醇﹑香茅醇﹑8-十七烷烯﹑12-甲基1,5.9,11-十三碳烯﹑金合欢醇﹑2-十五烷-1-醇﹑反式-金合欢醇乙酸酯﹑二十三烷单体化合物，上述单体化合物含量大于98.5％；

(十)优选上述主要含有总黄酮类化合物部位的柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实的30％乙醇水洗脱部位和70％乙醇水洗脱部位继续应用硅胶柱色谱、聚酰胺柱色谱、ODS-C₁₈柱色谱、葡聚糖凝胶柱色谱和制备高效液相色谱分离得到theaflavanosideⅡ、2(s)-theaflavano-sideⅣ、theaflavanosideⅢ、橙皮苷、新橙皮苷、柚皮素-7-O-龙胆二糖苷、2(s)-3′,4′-dimethoxy-5,7-dihydroxyflavanone-7-O-neohesperidoside、枸橘苷、6,8-二甲基-3′-甲氧基-5′-羟基-柚皮素-7-O-葡萄糖苷、2(s)-3′-methoxy-5,7,4′-trihydroxyflavanone-7-neohesperidoside、柚皮芸香苷、柚皮苷、山柰酚-3-O-芸香糖苷、异鼠李素-3-O-β-D-芸香糖苷、4′-甲氧基-异槲皮苷、槲皮素、槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、芦丁、异橙黄酮、6,7,8,3′4′-pentamethoxyflavone、5,7-二羟基色原酮、5-羟基-7,3′,4′,5′-四甲氧基黄酮、5-羟基-6,7,3′,4′,5′-五甲氧基黄酮、5,3′-二羟基-7,4′,5′-三甲氧基黄酮、5,7-二羟基-3′,4′,5′-三甲氧基黄酮、5,4′-二羟基-7,3′,5′-三甲氧基黄酮、5,7,4′-三羟基-6-甲氧基黄酮、5,7,4′-三羟基-8-甲氧基黄酮、5,7,4′-三羟基-3′,5′-二甲氧基黄酮、5,7,3′-三羟基-8,4′,5′-三甲氧基黄酮、5,7,3′,5′-四羟基-6,4′-二甲氧基黄酮、3,5,6,4′-四羟基-3′,5′-二甲氧基黄酮、5,7,3′,4′,5′-五甲氧基黄酮单体化合物，上述单体化合物含量大于98.5％；各洗脱部位或单体化合物在45-65℃减压回收溶剂至乙醇适量浓度，用冷冻干燥法或喷雾干燥法干燥，收集冻干粉或喷雾干燥粉，即得；

(十一)柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实总黄酮的制备，将上述柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实的30％乙醇水洗脱部位和70％乙醇水洗脱部位合并经聚酰胺柱色谱纯化得总含量大于90％的总黄酮类化合物并具有治疗血管性老年痴呆或缺血性心脏病或脑缺血疾病的显著疗效，或者本身为上述有效部位分离得到的theaflavanosideⅡ、2(s)-theaflavanosideⅣ、theaflavanosideⅢ、橙皮苷、新橙皮苷、柚皮素-7-O-龙胆二糖苷、2(s)-3′,4′-dimethoxy-5,7-dihydroxyflavanone-7-O-neohesperidoside、枸橘苷、6,8-二甲基-3′-甲氧基-5′-羟基-柚皮素-7-O-葡萄糖苷、2(s)-3′-methoxy-5,7,4′-trihydroxyflavanone-7-neohesperidoside、柚皮芸香苷、柚皮苷、山柰酚-3-O-芸香糖苷、异鼠李素-3-O-β-D-芸香糖苷、4′-甲氧基-异槲皮苷、槲皮素、槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、芦丁、异橙黄酮、6,7,8,3′4′-pentamethoxyflavone、5,7-二羟基色原酮、5-羟基-7,3′,4′,5′-四甲氧基黄酮、5-羟基-6,7,3′,4′,5′-五甲氧基黄酮、5,3′-二羟基-7,4′,5′-三甲氧基黄酮、5,7-二羟基-3′,4′,5′-三甲氧基黄酮、5,4′-二羟基-7,3′,5′-三甲氧基黄酮、5,7,4′-三羟基-6-甲氧基黄酮、5,7,4′-三羟基-8-甲氧基黄酮、5,7,4′-三羟基-3′,5′-二甲氧基黄酮、5,7,3′-三羟基-8,4′,5′-三甲氧基黄酮、5,7,3′,5′-四羟基-6,4′-二甲氧基黄酮、3,5,6,4′-四羟基-3′,5′-二甲氧基黄酮、5,7,3′,4′,5′-五甲氧基黄酮中的至少一种总含量大于90％的总黄酮类化合物并具有治疗血管性老年痴呆或缺血性心脏病或脑缺血疾病的显著疗效；

(十二)从上述柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实总提取物及其各洗脱部位或富集部位分离得到theaflavanosideⅡ、2(s)-theaflavanosideⅣ、theaflavanosideⅢ、橙皮苷、新橙皮苷、柚皮素-7-O-龙胆二糖苷、2(s)-3′,4′-dimethoxy-5,7-dihydro-xyflavanone-7-O-neohesper-idoside、枸橘苷、6,8-二甲基-3′-甲氧基-5′-羟基-柚皮素-7-O-葡萄糖苷、2(s)-3′-methoxy-5,7,4′-trihydroxy flavanone-7-neohesperidoside、柚皮芸香苷、柚皮苷、山柰酚-3-O-芸香糖苷、异鼠李素-3-O-β-D-芸香糖苷、4′-甲氧基-异槲皮苷、槲皮素、槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、芦丁、异橙黄酮、6,7,8,3′4′-pentamethoxyflavone、5,7-二羟基色原酮、5-羟基-7,3′,4′,5′-四甲氧基黄酮、5-羟基-6,7,3′,4′,5′-五甲氧基黄酮、5,3′-二羟基-7,4′,5′-三甲氧基黄酮、5,7-二羟基-3′,4′,5′-三甲氧基黄酮、5,4′-二羟基-7,3′,5′-三甲氧基黄酮、5,7,4′-三羟基-6-甲氧基黄酮、5,7,4′-三羟基-8-甲氧基黄酮、5,7,4′-三羟基-3′,5′-二甲氧基黄酮、5,7,3′-三羟基-8,4′,5′-三甲氧基黄酮、5,7,3′,5′-四羟基-6,4′-二甲氧基黄酮、3,5,6,4′-四羟基-3′,5′-二甲氧基黄酮、5,7,3′,4′,5′-五甲氧基黄酮中的至少一种单体化合物并具有治疗血管性老年痴呆或缺血性心脏病或脑缺血疾病的显著疗效；

(十三)上述方法制备得到的柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实的有效部位或有效成分还具有疏肝和胃、理气解郁、和血散瘀、和血调经、美容养颜、助消化功能、增强免疫力功能、减肥功能、辅助改善记忆功能、改善睡眠功能、缓解疲劳功能的传统功效。