[发明专利]链霉菌降解甲氧咪草烟除草剂的方法

说明书

本发明属于环境修复技术领域，特别涉及链霉菌降解甲氧咪草烟除草剂的方法。该方法包括：链霉菌的活化；筛选链霉菌的培养基；通过移液提取的方法提取甲氧咪草烟，并利用高效液相色谱法测定甲氧咪草烟的含量；利用链霉菌降解甲氧咪草烟除草剂。现有技术中对于甲氧咪草烟除草剂缺少有效的降解方法，而本发明利用链霉菌土壤中分布较多，利于筛选的优点，使用链霉菌进行原位修复对土著微生物的影响较小。本发明应用土壤中的微生物来降解环境中的农药具有快速、安全、环境友好的优点。

技术领域

本发明属于环境修复技术领域，特别涉及链霉菌降解甲氧咪草烟除草剂的方法。

背景技术

在20世纪80年代，美国氰胺公司以随机筛选为创作源，开发了一类乙酰乳酸合成酶抑制剂类的高效广谱性除草剂，名为咪唑啉酮类除草剂。由于该除草剂因具有高效、使用范围广、选择性强、使用方便等优点，曾在国际上占有绝对的市场，尤其是在美国。而在我国的东北三省尤其是黑龙江地区，广泛使用该类除草剂来防止田间杂草。

在咪唑啉酮类除草剂的6种销售产品中，甲氧咪草烟应用最为广泛，甲氧咪草烟于1997年上市，用于油菜、大豆、向日葵和水稻，向日葵是其主要应用作物，目前甲氧咪草烟的使用量稳步增长。但咪唑啉酮类除草剂在土壤中残留时间长，且由于我国是轮作套种，往往对后茬敏感作物产生药害。因此，如何解决其残留问题成为目前的一个重要课题。一般情况下，除草剂在土壤中可通过光解、水解以及微生物降解而消失。但众多研究证明，在需氧条件下的微生物降解是咪唑啉酮类除草剂的主要降解途径。

但是现有的微生物降解甲氧咪草烟除草剂，并没有找到一种在降解甲氧咪草烟除草剂的同时还能提取和检测甲氧咪草烟除草剂的方法。

发明内容

发明目的：

本发明提供了采用链霉菌降解甲氧咪草烟除草剂的方法，同时确定了除草剂的提取方法及最佳检测条件，其目的是通过探究链霉菌对甲氧咪草烟除草剂的降解效果和最佳条件，更加有效地减少咪唑啉酮类除草剂对环境的危害和影响。

技术方案：

链霉菌降解甲氧咪草烟除草剂的方法，该方法包括：

（1）链霉菌的活化；

（2）筛选链霉菌的培养基；

（3）通过移液提取的方法提取甲氧咪草烟，并利用高效液相色谱法测定甲氧咪草烟的含量；

（4）利用链霉菌降解甲氧咪草烟除草剂。

该方法的具体步骤是：

（1）将链霉菌(Streptomyces sp.) JB接种于无机盐固体培养基上，然后在倒置于培养箱中在恒温下培养；高压灭菌后，加入甲氧咪草烟，并用接种环挑取固体培养基上的链霉菌JB接入其中，在摇床中黑暗的条件下培养；

（2）将菌株JB在含有100mg/L的甲氧咪草烟的无机盐液体培养基和蛋白胨培养基中分别进行培养，选择甲氧咪草烟降解率高的作为链霉菌的培养基；

（3）将链霉菌的培养基放入离心管中，加入乙腈、乙酸；震荡后加入NaCl，摇晃直到能明显观察到液体分层为止；离心后取上层有机液，冷藏，即为提取的甲氧咪草烟；利用高效液相色谱仪检测甲氧咪草烟的含量；

（4）利用链霉菌降解甲氧咪草烟除草剂；将链霉菌JB接种于步骤（2）中筛选出的培养基中，甲氧咪草烟除草剂浓度为100mg/L时，链霉菌JB的投入量为5-10%，温度为25-30℃，pH值为6.5-8.0。

进一步地，步骤（1）中甲氧咪草烟的加入量的质量与无机盐液体培养基的体积比为（5-15）mg：100ml；