[发明专利]一种复合微生物菌剂及其用于土壤增肥和含重金属场地生态恢复的方法

权利要求书

1.一种复合微生物菌剂，其特征在于，由下列微生物等质量比混合制成：巨大芽孢杆菌GRINML5，盐生固氮菌GRINML6，假单胞菌GRINML7，地衣芽孢杆菌GRINML8，寡营养单胞菌GRINML9，短杆菌GRINM L2，硫酸盐还原菌EM2，硫酸盐还原菌SRB-4，脂环酸杆菌Biometek-A；

其中，巨大芽孢杆菌GRINML5分类命名为：巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)GRINML5，保藏单位为：中国典型培养物保藏中心，地址：中国武汉武汉大学，保藏日期为：2018年10月15日，保藏编号为：CCTCC NO：M2018672；

盐生固氮菌GRINML6分类命名为：盐生固氮菌(Azotobacter salinestris)GRINML6，保藏单位为：中国典型培养物保藏中心，地址：中国武汉武汉大学，保藏日：2018年10月15日，保藏登记号：CCTCC NO：M2018673；

假单胞菌GRINML7分类命名为：假单胞菌(Pseudomonas sp.)GRINML7，保藏单位为：中国典型培养物保藏中心，地址：中国武汉武汉大学，保藏日期为：2018年10月15日，保藏编号为：CCTCC NO：M2018674；

地衣芽孢杆菌GRINML8分类命名为：地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)GRINML8，保藏单位为：中国典型培养物保藏中心，地址：中国武汉武汉大学，保藏日：2018年10月15日，保藏编号为：CCTCC NO：M2018675；

寡营养单胞菌GRINML9分类命名为：寡营养单胞菌(Stenotrophomonas sp.)GRINML9，保藏单位为：中国典型培养物保藏中心，地址为：中国武汉武汉大学，保藏日期为：2018年10月15日，保藏编号为：CCTCC NO：M 2018676；

短杆菌GRINM L2分类命名为：短杆菌(Brevibacterium sp.)GRINM L2，保藏单位为：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏日期：2016年9月29日，保藏编号为：CGMCC No.13064；

硫酸盐还原菌EM2分类命名为：硫酸盐还原菌(Desulfovibrio vulgaris)EM2，保藏单位为：中国典型培养物保藏中心，地址为：中国武汉武汉大学，保藏日期为：2017年11月1日，保藏编号为：CCTCC M 2017645；

硫酸盐还原菌SRB-4的分类名称为：Uncultured sulfate-reducing bacterium SRB-4，保藏单位为：中国典型培养物保藏中心，地址：武汉大学内，保藏日期为：2015年9月14日，保藏编号为：CCTCC NO：M2015535；

脂环酸杆菌Biometek-A分类命名为：脂环酸杆菌(Alicyclobacillus sp.)Biometek-A；保藏单位为：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为：中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏日期为：2012年12月26日，保藏编号为：CGMCC No.7038。

2.一种用于土壤增肥和含重金属场地生态恢复的方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)配制培养基

培养基配方为：葡萄糖3g/L，K₂HPO₄ 0.5g/L，MgSO₄ 1.5g/L，(NH₄)₂SO₄ 1g/L，蛋白胨2g/L，CaCl₂ 0.5g/L，121℃灭菌20min，冷却至室温；或，

培养基配方为：蔗糖1g/L，K₂HPO₄ 0.5g/L，MgSO₄ 1.5g/L，(NH₄)₂SO₄ 1g/L，蛋白胨0.3g/L，CaCl₂ 0.5g/L，121℃灭菌20min，冷却至室温；

2)将权利要求1所述的复合微生物菌剂加入到步骤1)的培养基中，添加质量为培养基质量的1-10％，15-40℃下静置培养1-20天至对数生长期，制成微生物种子液；

3)将步骤2)制成的微生物种子液使用步骤1)的培养基，15-40℃下静置培养1-20天至对数生长期，添加种子液体积为培养基体积的1-10％，反复进行放大培养2-3次，制成微生物菌液；

4a)将作物秸秆或落叶进行粉粹至1-20mm，将步骤3)制成的微生物菌液按照固液体积比3:1的比例喷淋到粉碎后的作物秸秆或落叶中，在15-40℃下静置培养5-30天制成固体培养物，然后将固体培养物按照2-50kg/m²的量添加到土壤中；

或4b)直接将步骤3)制成的微生物菌液直接按照总量为5-300L/m³的比例分1-100批次喷洒到土壤中，每次间隔时间1天-1年。