[发明专利]一种连续酶促酰化花青素的方法

说明书

一种连续酶促酰化花青素的方法，包括以下步骤：（1）底物的制备：将花青素及酰基供体一起溶于含有抗氧化剂的醇类溶剂中，得到底物；（2）酶促酰化：将步骤（1）得到的底物上柱于固定化酶柱，收集流出液；（3）低温除醇：将步骤（2）收集的流出液进行浓缩，回收醇类溶剂，得浓缩液；（4）树脂吸附：将步骤（3）得到的浓缩液稀释后上吸附树脂柱后，用醇类溶剂解吸，收集解吸液；（5）浓缩干燥：将步骤（4）收集的解吸液进行浓缩并干燥，即得酰化花青素产品。本发明方法采用可连续酶促酰化花青素，且整个工艺条件温和，环境友好，比较适宜于规模化生产。

技术领域

本发明涉及一种酰化花青素的方法，具体涉及一种连续酶促酰化花青素的方法。

背景技术

花青素广泛存在于植物的根茎叶花果等植物器官的细胞液中，是一种重要的植物色素及生理活性功能成分。花青素安全无毒，具有很强的抗氧化、清除自由基作用；能降低高血脂及甘油酯、胆固醇水平；具有抗变异、抗肿瘤、抗过敏、保护胃粘膜等多种功能，因此花青素在食品、化妆品、医药领域有巨大的应用潜力。但由于花青素结构的稳定性差，限制了其广泛应用，提高花青素的稳定性，是开发利用天然花青素急需解决的技术问题。

花青素的功能、稳定性与其结构存在密切关系，特别是其酰基结构。酰化反应是提高花青素结构稳定性的重要方法。传统化学酰化方法存在许多不足和缺陷，如反应区域选择性差，易产生副产物，必须采用保护措施，步骤多，耗时长，反应条件剧烈，且引入溶剂多，分离纯化困难。而酶促酰化因其反应条件温和，选择性强，产品质量高的特点，但酶促酰化反应中酶的利用率以及酶促酰化反应的产量依然较低，有待进一步提高。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是，克服以上不足，提供一种连续酶促酰化花青素的方法，所述方法可连续酶促酰化花青素，且整个工艺条件温和，环境友好，比较适宜于规模化生产。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案如下：

一种连续酶促酰化花青素的方法，包括以下步骤：

（1）底物的制备：将花青素及酰基供体一起溶于含有抗氧化剂的醇类溶剂中，得到底物；

（2）酶促酰化：将步骤（1）得到的底物上柱于固定化酶柱，收集流出液；

（3）低温除醇：将步骤（2）收集的流出液进行浓缩，回收醇类溶剂，得浓缩液；

（4）树脂吸附：将步骤（3）得到的浓缩液稀释后上吸附树脂柱后，用醇类溶剂解吸，收集解吸液；

（5）浓缩干燥：将步骤（4）收集的解吸液进行浓缩并干燥，即得酰化花青素产品。

大孔树脂固定化酶可以实现连续进行酶接触反应，酶可以不间断与底物充分接触并释放，然后再与新的未反应底物接触，实现酶的重复利用，因此，相比液相状态下，酶的利用率得到极大的提高。

优选的，步骤（1）中，所述固定化酶是经载体固定的南极假丝酵母脂肪酶B（CALB）、毛霉脂肪酶(RML)、洋葱假单胞菌脂肪酶（PSL）、柱状假丝酵母脂肪酶（CCL）或猪胰脂肪酶（PPL）；更为优选的，所述固定化酶是经载体固定的酶为南极假丝酵母脂肪酶B（CALB）、毛霉脂肪酶(RML)或洋葱假单胞菌脂肪酶（PSL）。

优选的，步骤（1）中，所述固定化酶的载体为为二乙烯苯树脂、苯乙烯树脂或丙烯酸树脂中的一种；更为优选的，所述固定化酶的载体为酶载体为二乙烯苯树脂。

优选的，步骤（1）中，所述醇类溶剂为乙醇；优选的，所述乙醇是体积分数为80%～99%的乙醇/水溶液；优选的，乙醇是体积分数为85%～95%的乙醇/水溶液；所述固定化酶柱的柱径高比为1:2～10；优选的，固定化酶柱的柱径高比为1:4～8。