[发明专利]一种用于人月经血的保存液及其制备方法

说明书

本发明属于干细胞保存的生物技术领域，提供了一种用于人月经血的保存液及其制备方法。保存液的成分包括生理盐水、水蛭素、葡萄糖、羟乙基淀粉、左氧氟沙星、复合维生素、谷胱甘肽、坏死性凋亡抑制剂Necrostatin‑1/RIP1激酶抑制剂，其制备方法如下：1）制备A液：往生理盐水中分别加入葡萄糖、水蛭素以及左氧氟沙星；2）制备B液：往生理盐水中分别加入羟乙基淀粉、复合维生素以及谷胱甘肽；3）制备C液：将A液、B液混合之后加入坏死性凋亡抑制剂Necrostatin‑1/RIP1激酶抑制剂，用滤膜过滤后于4℃下保存备用，本发明的保存液能在48小时内维持宫内膜干细胞原有的生物学特性，细胞质量稳定，纯度高。

技术领域

本发明属于干细胞保存的生物技术领域，具体涉及一种人月经血保存液及其制备方法。

背景技术

月经是由下丘脑、垂体和卵巢三者生殖激素之间的相互作用来调节的，在月经周期中的月经期和增殖期，血中雌二醇和孕酮水平很低，从而对腺垂体和下丘脑的负反馈作用减弱或消除，导致下丘脑对促进性腺激素释放激素的分泌增加，继而导致腺垂体分泌的卵泡刺激素和黄体生成素增多，因而使卵泡发育，雌激素分泌逐渐增多。此时，雌激素又刺激子宫内膜进入增殖期。黄体生成素使孕激素分泌增多，导致排卵。此期中雌激素与孕激素水平均升高。这对下丘脑和腺垂体产生负反馈抑制加强的作用，因而使排卵刺激素和黄体生成素水平下降，导致黄体退化，进而雌激素和孕激素水平降低。子宫内膜失去这二种激素的支持而剥落、出血，即发生月经。此时，雌激素和孕激素的减少，又开始了下一个月经周期。

月经的成分主要是血液(3/4动脉血，1/4静脉血)，子宫内膜组织碎片和各种活性酶及生物因子，其中纤维蛋白溶解酶使月经血呈液态，不致凝固，前列腺素起收缩子宫的作用。月经血在离体情况下在短时间内迅速凝固；活力下降，这直接影响了月经血中的宫内膜干细胞的细胞质量。宫内膜干细胞的活力直接与月经血保存相关；月经血离体后凝结、经血中的激素等对细胞质量的影响；如何避免上述成为了首要解决的问题。此外，这些问题直接制约了月经血来源的宫内膜干细胞体外培养成功与否；因此，兹需开发一种月经血保存液，一方面满足抗凝、抑菌的作用，另一方面可满足月经血离体保存48h后仍能提取出数量充足、质量佳的宫内膜干细胞。

现有技术中的月经保存液一般会添加青霉素、氨基酸、人血白蛋白等物质用于保存离体组织，但是由于其营养成分单一且成本较高、抗生素浓度大等原因，虽抗生素能降低染菌几率，但对胎盘干细胞存在一定的毒性，导致种子细胞在长期保存或运输中出现活力低下、甚至死亡等现象。随后人们为了进一步改善保存液的组成体系，以无机离子构成的缓冲液的基础上添加数种氨基酸和抗生素以维持离体细胞活性、降低染菌率。这些措施虽然在较长时间内很好的维持了种子细胞的活性，但保存液的成分复杂，配制需要经过称量、灭菌等步骤，操作过程繁琐，不能便携应用。因此为了适应临床应用需要，开发一种营养成分多元且方便配置的胎盘保存液成为了当务之急。

发明内容

针对以上问题，本发明的目的在于提供一种用于人月经血的保存液及其制备方法，提供一种能够很好的维持月经来源的宫内膜干细胞的活力，不引起细胞的功能性变异，现有技术中，白蛋白等常作为维持胎盘间充质干细胞的活力营养来源，本发明在此基础上进一步改进了保存液的离子缓冲体系和营养体系，同时优化制剂中的成分组成和改良运输条件，尽可能的维持细胞存活率，维持其生物特性。

本发明的技术内容如下：

本发明提供了一种用于人月经血的保存液，保存液的成分包括生理盐水、水蛭素、葡萄糖、羟乙基淀粉、左氧氟沙星、复合维生素、谷胱甘肽、坏死性凋亡抑制剂Necrostatin-1/RIP1激酶抑制剂。

进一步地，所述水蛭素的浓度为(1～5)×水蛭素，水蛭素是水蛭及其唾液腺中已提取出多种活性成分中活性最显著并且研究得最多的一种成分，它是由65～66个氨基酸组成的小分子蛋白质(多肽)，水蛭素对凝血酶由极强的抑制作用，是迄今为止所发现最强的凝血酶天然特异抑制剂；