[发明专利]一种僵蚕及其伪品的指纹图谱鉴别方法

说明书

本发明公开了一种僵蚕及其伪品的指纹图谱检测方法，它是采用高效液相色谱法检测，包括如下步骤：1)对照品溶液制备：取芦丁、金丝桃苷、槲皮素、山奈酚对照品，加甲醇溶解，即得对照品溶液；2)供试品溶液制备：取待检样品，加甲醇提取，即得供试品溶液；3)分别吸取对照品溶液和供试品溶液注入高效液相色谱仪，记录色谱图。本发明的检测方法，可以检测芦丁、金丝桃苷、槲皮素、山奈酚，也可用于僵蚕的检测，结果可靠，且本发明的鉴别方法专属性强，精密度好，重复性好，准确度高，可实现僵蚕真伪的准确鉴别。

技术领域

本发明具体涉及一种僵蚕及其伪品的指纹图谱鉴别方法。

背景技术

僵蚕为蚕蛾科昆虫家蚕Bombyx mori L 4～5龄的幼虫感染(或人工接种)白僵菌Beauveria bassiana(Bals)Vuill而致死的干燥体，具有息风止痉，祛风止痛，化痰散结之功效，是常用动物类中药材。常用于肝风夹痰，惊痫抽搐，小儿急惊，破伤风，中风口风热头痛，目赤咽痛，风疹瘙痒，发颐痄腮。

传统的伪品僵蚕大多为用石灰水将家蚕掺白加工而成，也有将地蚕冒充正品僵蚕使用，由于这些伪品外观、显微形态均与正品相似，难以用常规方法，进行有效鉴别。

《中国药典》2015版鉴别项下，只收载其粉末的显微鉴别，该鉴别方法已有研究报道其准确度不高。现有文献中，也有用薄层色谱鉴别僵蚕，如张丽增等.僵蚕薄层鉴别方法的改进[J].中国药品标准,2016,7(4):61-62,该方法只利用僵蚕中的一种特征成分进行鉴别，而伪品种类多，只通过一种特征成分鉴别同样易造成错检，为患者的用药带来隐患。而目前还没有通过高效液相色谱法的指纹图谱鉴别僵蚕及其伪品的报道。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供了一种僵蚕及其伪品的指纹图谱检测方法，它是采用高效液相色谱法检测，包括如下步骤：

1)对照品溶液制备：取芦丁、金丝桃苷、槲皮素、山奈酚对照品，加甲醇溶解，即得对照品溶液；

2)供试品溶液制备：取待检样品，加甲醇提取，即得供试品溶液；

3)分别吸取对照品溶液和供试品溶液注入高效液相色谱仪，记录色谱图；色谱条件如下：

色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；检测波长：365nm和/或285nm；流动相：以乙腈为流动相A，以0.1％磷酸溶液为流动相B；梯度洗脱程序如下：

进一步地，步骤1)所述对照品溶液每1ml含芦丁、金丝桃苷、槲皮素、山奈酚各5～15μg，优选10μg。

进一步地，步骤2)所述待检样品与甲醇的质量体积比为2g：20ml。

进一步地，步骤2)所述甲醇浓度为75-95％(v/v)，优选80％。

进一步地，步骤2)所述提取为超声提取，功率250W，频率100kHz，时间30min。

进一步地，步骤3)所述色谱条件中柱温30℃，进样量10μL，体积流量为0.8mL·min^-1。

本发明还提供了一种僵蚕及其伪品的鉴别方法，它包括如下步骤：

a、取待检僵蚕或僵蚕伪品；

b、按前述方法检测；

c、分析指纹谱图。

进一步地，所述检测波长365nm下的指纹图谱中有9个特征峰显示为僵蚕，仅有2个特征峰显示为僵蚕伪品；所述9个特征峰中包含芦丁、金丝桃苷、槲皮素和山奈酚参照物相应的峰；所述2个特征峰与9个特征峰的峰8和峰9相应。