[发明专利]一种羊源尸毒梭菌的检测试剂盒

说明书

本发明属于PCR检测试剂盒领域，尤其涉及一种羊源尸毒梭菌的检测试剂盒。本发明的试剂盒关键在于具有如SEQ ID NO.1‑2、SEQ ID NO.3‑4和/或SEQ ID NO.5‑6所述的引物对；前述引物互不干扰，可使试剂盒完成高灵敏度和特异性的检测。本发明的试剂盒弥补了羊源尸毒梭菌检测试剂的空白，具有良好的应用前景。

技术领域

本发明属于PCR检测试剂盒领域，尤其涉及一种羊源尸毒梭菌的检测试剂盒。

背景技术

尸毒梭菌(Clostridium cadaveris)(又称尸体梭菌)是在腐烂的尸体中发现的最常见的细菌之一，但在活人身上极其罕见。该菌广泛分布于土壤、海底沉积物和人的粪便中，该菌为厌氧的革兰氏阳性杆菌，周生鞭毛运动，孢子卵圆、端生。尸毒梭菌为芽孢杆菌科梭菌属群IV成员，群IV还包括缓腐梭菌、腐败梭菌、海梭菌、破伤风梭菌及腐化梭菌。

尸毒梭菌是一种致病菌，可以从创伤感染、脓肿及血液样品等临床样品中检出。人们有必要对尸毒梭菌采取预防和监测措施，其中，检测试剂盒就是其中一种方便快捷的工具。

目前关于尸毒梭菌的报道很少。1991年，田军川等从变质兔肉罐头中检出尸毒梭菌产毒株，这是国内鲜有的报道。基于有限报道，人们尚未开发出相应的检测试剂盒。

尸毒梭菌在入侵宿主后由于需要在宿主的免疫系统中存活下来，会进行适应性的进化，导致不同种类的宿主生物中尸毒梭菌的基因组存在一定的区别，以至于根据genbank等已有基因组数据库进行常规的PCR引物设计，不一定能检测分离自各种不同动物的尸毒梭菌。目前尚未见羊源(以羊为宿主)尸毒梭菌的报道，因此更没有检测羊源尸毒梭菌的PCR引物或试剂盒。

发明内容

本发明的目的是提供一种高灵敏度、高特异性的羊源尸毒梭菌的检测试剂盒。

本发明的技术方案包括：

一种羊源尸毒梭菌的PCR检测试剂盒，它包括序列如SEQ ID NO.1-2、SEQ IDNO.3-4和/或SEQ ID NO.5-6所述的引物对。

如前述的试剂盒，它包括如SEQ ID NO.1-2、SEQ ID NO.3-4和SEQ ID NO.5-6所述的引物对。

如前述的试剂盒，它还包括PCR用预混液。

进一步的，所述PCR用预混液是1.1×T3 Super PCR Mix。

一种羊源尸毒梭菌的PCR检测方法，它是使用前述的试剂盒对样品DNA进行检测。

如前所述的检测方法，其PCR反应条件是：98℃预变性2min；98℃变性10s，59℃退火15s，72℃延伸30s，共35个循环；72℃再延伸2min。

序列如SEQ ID NO.1-2、SEQ ID NO.3-4和/或SEQ ID NO.5-6所述的引物对在制备羊源尸毒梭菌的PCR检测试剂中的用途。

发明人从腹泻羊羔体内分离得到一株羊源尸毒梭菌LJH-1，并设计得到一种三重PCR检测试剂盒，填补了市面缺乏羊源尸毒梭菌检测试剂盒的空白。

本发明的三重PCR检测试剂盒，其引物间不会相互干扰，能够达到很高的灵敏度，可检测浓度低至7.720×10^-2ng的羊源尸毒梭菌DNA。