[发明专利]提高葡萄糖氧化酶活性的方法、突变体及其应用有效
| 申请号： | 201910922705.1 | 申请日： | 2019-09-27 |
| 公开（公告）号： | CN110628738B | 公开（公告）日： | 2021-01-12 |
| 发明（设计）人： | 钱江潮;张文玉;周虎志;周航成 | 申请（专利权）人： | 华东理工大学 |
| 主分类号： | C12N9/04 | 分类号： | C12N9/04;C12N15/53;C12N15/81;C12N1/19;C12R1/84 |
| 代理公司： | 上海专利商标事务所有限公司 31100 | 代理人： | 陈静 |
| 地址： | 200237 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 提高 葡萄糖 氧化酶 活性 方法 突变体 及其 应用 | ||
1.葡萄糖氧化酶突变体，其特征在于，其氨基酸序列对应于SEQ ID NO:1所示氨基酸序列，
第20位由Val突变为Trp，第30位由Thr突变为Val；
第20位由Val突变为Trp，第30位由Thr突变为Trp；
第20位由Val突变为Met，第30位由Thr突变为Ser；或
第20位由Val突变为Cys，第30位由Thr突变为Ser。
2.如权利要求1所述的突变体，其特征在于，所述突变体的氨基酸序列对应于SEQ IDNO:1，第20位由Val突变为Trp，第30位由Thr突变为Val。
3.分离的多核苷酸，其特征在于，所述的多核苷酸编码权利要求1～2任一所述的突变体。
4.一种载体，其特征在于，它含有权利要求3所述的多核苷酸。
5.一种遗传工程化的宿主细胞，其特征在于，它含有权利要求4所述的载体，或基因组中整合有权利要求3所述的多核苷酸。
6.一种生产权利要求1所述的葡萄糖氧化酶的突变体的方法，其特征在于，包括步骤：
(1)培养权利要求5所述的宿主细胞，获得培养物；和
(2)从培养物中分离权利要求1所述的葡萄糖氧化酶突变体。
7.权利要求1～2任一所述的葡萄糖氧化酶突变体的用途，用于催化葡萄糖的氧化，生成过氧化氢和葡萄糖酸-δ-内酯，或生成葡萄糖酸。
8.一种提高葡萄糖氧化酶的酶活性、催化效率或底物亲和力的方法，其特征在于，所述方法包括：对应于SEQ ID NO:1所示氨基酸序列，将葡萄糖氧化酶进行选自下组的突变：
第20位由Val突变为Trp，第30位由Thr突变为Val；
第20位由Val突变为Trp，第30位由Thr突变为Trp；
第20位由Val突变为Met，第30位由Thr突变为Ser；或
第20位由Val突变为Cys，第30位由Thr突变为Ser。
9.一种用于氧化葡萄糖的组合物，其特征在于，其中含有权利要求1～2任一所述的葡萄糖氧化酶突变体，以及食品学、药学或工业学上可接受的载体。
10.一种用于氧化葡萄糖的试剂盒，其特征在于，其中含有权利要求9所述的组合物；或，含有权利要求1～2任一所述的葡萄糖氧化酶突变体。
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