[发明专利]一种抗黑穗病薏苡种质的鉴定方法有效
| 申请号： | 201910923411.0 | 申请日： | 2019-09-27 |
| 公开（公告）号： | CN110607387B | 公开（公告）日： | 2023-03-14 |
| 发明（设计）人： | 付瑜华;蒙秋伊;李秀诗;杨小雨;周祥;敖茂宏;黎青;李志芳;周明强 | 申请（专利权）人： | 贵州省亚热带作物研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12N15/11 |
| 代理公司： | 贵州派腾知识产权代理有限公司 52114 | 代理人： | 周黎亚 |
| 地址： | 562400 贵州省黔西南*** | 国省代码： | 贵州;52 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 黑穗病 薏苡 种质 鉴定 方法 | ||
1.一种薏苡抗黑穗病种质的鉴定方法，包括DNA提取、DNA电泳检测、PCR扩增反应、PCR扩增产物鉴定，其特征在于，所述PCR扩增反应采用ATP6-F和ATP6-R作为引物；
其中ATP6-F是GGWGCTAGGAATCCTGMAAG，ATP6-R是CTCTAAAYCTACCWGTACTTGG。
2.如权利要求1所述的薏苡抗黑穗病种质的鉴定方法，其特征在于，所述ATP6-F和ATP6-R引物来源于Sporisorium和Ustilago线粒体全长序列。
3.如权利要求1所述的薏苡抗黑穗病种质的鉴定方法，其特征在于，所述PCR扩增反应：PCR扩增体系为总体积50μL，内含60ng DNA模板，2.5U LATaq TaKaRa，2.0mM MgCl2，2.5mMeach dNTP，0.5μMATP6-F引物，0.5μMATP6-R引物，ddH2O补足到50μL；
PCR扩增程序为：94℃ 30s,53℃ 30s,72℃ 35s，35个循环。
4.如权利要求1所述的薏苡抗黑穗病种质的鉴定方法，其特征在于，所述PCR扩增产物鉴定：用1.5％琼脂糖电泳检测扩增产物，若检测到一条长为550bp的目的条带，则表明该薏苡植株已被黑穗病病原菌侵染，且该薏苡植株在田间未表现黑穗病，说明该薏苡植株为抗黑穗病薏苡种质；若未检测到目的条带，则说明该薏苡植株未被黑穗病病原菌侵染。
5.如权利要求1所述的薏苡抗黑穗病种质的鉴定方法，其特征在于，所述DNA提取为：薏苡叶片在液氮中充分研磨，取0.1g加入到0.8mL CTAB提取液中，65℃水浴30min，冷却至室温，加入等体积的体积比为24：1的氯仿/异戊醇，上下颠倒数次，12000rmp 4℃离心15min，取上清，再加入等体积的体积比为24：1的氯仿/异戊醇，上下颠倒数次，12000rmp 4℃离心15min，取上清液，加入2/3体积预冷的异丙醇，置于-20℃20min，取出放置于常温后，用枪头挑出絮状沉淀放于1.5mL离心管中或12000rpm常温离心10min后倒出上清液，用70％乙醇洗涤DNA沉淀两次，无水乙醇洗涤DNA沉淀1次，风干，溶于0.5mL TE溶液中。
6.如权利要求1所述的薏苡抗黑穗病种质的鉴定方法，其特征在于，所述DNA电泳检测采用1.5％琼脂糖凝胶电泳。
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