[发明专利]用于快速检测腺病毒的IgM抗体胶体金试纸条及其制备方法有效
申请号: | 201910924678.1 | 申请日: | 2019-09-27 |
公开(公告)号: | CN111044728B | 公开(公告)日: | 2023-05-30 |
发明(设计)人: | 周荣;王长兵;李潇;刘文宽;田新贵;游爱萍;周志超 | 申请(专利权)人: | 广州医科大学附属第一医院;广州呼吸健康研究院 |
主分类号: | C07K14/01 | 分类号: | C07K14/01 |
代理公司: | 广州新诺专利商标事务所有限公司 44100 | 代理人: | 林玉芳;刘婉 |
地址: | 510120 广*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 用于 快速 检测 病毒 igm 抗体 胶体 试纸 及其 制备 方法 | ||
1.一种用于快速检测腺病毒的IgM抗体胶体金试纸条,其特征在于:所述IgM抗体胶体金试纸条包括基板,所述基板上依次设有样品垫、胶体金标记垫、硝酸纤维素膜和吸水纸,所述样品垫的一部分叠覆于所述胶体金标记垫上,所述胶体金标记垫的一部分叠覆于所述硝酸纤维素膜上,所述吸水纸的一部分与所述硝酸纤维素膜搭接,所述胶体金标记垫含有羊抗人IgM抗体-胶体金标记物,所述硝酸纤维素膜上设有检测线和对照线,所述检测线包被有腺病毒特异性抗原多肽-载体蛋白,所述对照线包被有人IgM抗体;
所述腺病毒特异性抗原多肽-载体蛋白中的腺病毒特异性抗原多肽为4型腺病毒特异性抗原多肽,其氨基酸序列如序列表SEQ ID NO.2所示。
2.根据权利要求1所述的IgM抗体胶体金试纸条,其特征在于:所述腺病毒特异性多肽-载体蛋白根据EDC方法将腺病毒特异性多肽与载体蛋白进行化学交联获得。
3.权利要求1所述的IgM抗体胶体金试纸条的制备方法,其特征在于包括如下步骤:
步骤1:制备所述腺病毒特异性抗原多肽-载体蛋白;
步骤2:制备含有所述羊抗人IgM抗体-胶体金标记物的胶体金标记垫;
步骤3:将所述样品垫、所述胶体金标记垫、所述硝酸纤维素膜和所述吸水纸粘贴在所述基板上;
步骤4:将所述腺病毒特异性抗原多肽-载体蛋白和所述人IgM抗体喷涂在所述硝酸纤维素膜上。
4.根据权利要求3所述的方法,其特征在于:所述步骤1的具体操作如下:将2mg KLH蛋白用0.2ml的0.1M MES溶解,将2mg腺病毒特异性抗原多肽用0.5ml的0.1M MES溶解,然后将两种溶液混合,再加入50μl质量体积浓度为1%的EDC溶液,混合均匀,室温下反应,透析,得到所述腺病毒特异性抗原多肽-载体蛋白。
5.根据权利要求3所述的方法,其特征在于:所述步骤2的具体操作如下:100ml的超纯水加热沸腾后加入1-1.5ml的氯金酸,搅拌均匀后迅速加入1-1.5ml的1%(质量浓度)柠檬酸三钠溶液,液体变成红色后继续沸腾10min,冷却至常温,将胶体金溶液倒入烧杯中,放置到磁力搅拌器上搅拌,同时用0.2M 碳酸钾调整pH至8.0,然后加入1ml 羊抗人IgM抗体,磁力搅拌30min,加入0.1ml 封闭液磁力搅拌10min,然后取出标记好羊抗人IgM抗体的胶体金溶液,9000g 离心30min,弃去上清,加入10ml胶体金稀释液重悬胶体金沉淀,充分混匀后喷涂到所述胶体金标记垫上,真空冷冻干燥。
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