[发明专利]一种卡瓦胡椒药材中有效成分快速检测方法

权利要求书

1.一种卡瓦胡椒药材中有效成分快速检测方法，其特征在于，具体包括如下步骤：S1配制对照品溶液

分别称取对照品，对照品包括苯甲酸、麻醉椒苦素、二氢麻醉椒苦素、醉椒素、二氢醉椒素、麻醉椒素、去甲氧基醉椒素、卡瓦胡椒素A和黄卡瓦胡椒素B；分别向对照品加入溶剂制成对照品贮备液；

S2测定各对照品相对校正因子

向对照品贮备液中加入溶剂稀释得对照品稀释液，分别测定对照品稀释液吸光度值，由吸光度值分别计算对照品的百分吸收系数；将苯甲酸作为参照物，分别计算参照物的百分吸收系数和对照品的百分吸收系数的比值得到相对校正因子；

S3配制样品溶液

取待测样品加入苯甲酸溶液，制备得到样品溶液；S4液相色谱检测

分别将样品溶液和对照品贮备液进行液相色谱检测，分别得到参照物、各对照品和样品色谱峰的保留时间，分别计算各对照品色谱峰保留时间与参照物色谱峰保留时间的比值得到对照品的相对保留时间，由对照品相对保留时间确定样品溶液检测色谱峰中各成分的归属，同时读取样品溶液检测结果中各待测成分色谱峰的峰面积以及参照物色谱峰的峰面积；

S5成分含量的计算

由相对校正因子、各待测成分色谱峰峰面积、参照物贮备液的浓度和参照物色谱峰的峰面积分别计算样品中麻醉椒苦素、二氢麻醉椒苦素、醉椒素、二氢醉椒素、麻醉椒素、去甲氧基醉椒素、卡瓦胡椒素A、黄卡瓦胡椒素B的含量；

步骤S4中所述液相色谱检测的色谱条件是：填料为C18的色谱柱，色谱柱内径为2.1mm，且长度为100mm，填料粒径为1.7μm，洗脱条件为洗脱液A-洗脱液B-洗脱液C，梯度洗脱：0～5min洗脱液A为70～75％，洗脱液B为10％，洗脱液C为20～15％；5～11min洗脱液A为75～65％，洗脱液B为10％，洗脱液C为15～25％；11～15min洗脱液A为65～45％，洗脱液B为10％，洗脱液C为25～45％；15～18min洗脱液A为45～70％，洗脱液B为10％，洗脱液C为45～20％；流速为0.2ml/min；进样量：1μl；柱温：35℃；检测波长232nm；所述洗脱液A为浓度为0.1％乙酸水溶液，所述洗脱液B为乙腈，所述洗脱液C为异丙醇；

步骤S4中相对保留时间的计算公式为

r＝r_x/r_s

式中r_x和r_s分别为待测成分的保留时间和参照物的保留时间；

步骤S4还包括液相色谱系统适应性试验，所述液相色谱系统适应性试验的检测条件与所述液相色谱检测的色谱条件相同。

2.根据权利要求1所述的一种卡瓦胡椒药材中有效成分快速检测方法，其特征在于，步骤S1和步骤S2中所述溶剂相同，包括甲醇、乙醇或水中的至少一种。

3.根据权利要求2所述的一种卡瓦胡椒药材中有效成分快速检测方法，其特征在于，步骤S1中加入溶剂分别制成浓度为0.1-1mg/ml的对照品贮备液。

4.根据权利要求1所述的一种卡瓦胡椒药材中有效成分快速检测方法，其特征在于，步骤S2中吸光度值检测的波长与步骤S4中液相色谱检测的波长相同，为232nm。

5.根据权利要求4所述的一种卡瓦胡椒药材中有效成分快速检测方法，其特征在于，步骤S2中分别将各对照品稀释液加入至比色皿中，置于紫分光光度计中，测定各对照品稀释液在232nm处的吸光度值为0.3-0.8。

6.根据权利要求1所述的一种卡瓦胡椒药材中有效成分快速检测方法，其特征在于，步骤S3具体为：取待测样品精密称量，加入10-50倍量的溶剂经过回流、超声或冷浸处理，过滤后加入苯甲酸对照品溶液得到样品溶液，所述苯甲酸对照品溶液的浓度是0.1-1mg/ml。

7.根据权利要求1所述的一种卡瓦胡椒药材中有效成分快速检测方法，其特征在于，步骤S5中采用的计算公式为

所述W_x为待测成分的含量，所述C_x为样品溶液中待测成分的浓度，所述V为样品溶液的体积，所述m为样品的称样量，所述A_x为各待测成分的色谱峰峰面积，所述C_s为参照物贮备液的浓度，所述f_s/_x是相对校正因子，所述A_s为样品溶液中参照物色谱峰的峰面积。