[发明专利]一种卡瓦胡椒药材中有效成分定量检测方法

权利要求书

1.一种卡瓦胡椒药材中有效成分定量检测方法，其特征在于，具体包括如下步骤：

S1 配制对照品溶液

分别称取对照品，对照品包括麻醉椒苦素、二氢麻醉椒苦素、醉椒素、二氢醉椒素、麻醉椒素、去甲氧基醉椒素、卡瓦胡椒素A和黄卡瓦胡椒素B；分别向对照品加入溶剂制成对照品贮备液；

S2 各对照品相对校正因子的测定

向对照品贮备液中加入溶剂稀释得对照品稀释液，分别测定对照品稀释液吸光度值，由吸光度值分别计算对照品的百分吸收系数；并根据结果在所述对照品中选取一参照物，分别计算对照品的百分吸收系数和参照物的百分吸收系数的比值得到相对校正因子；

S3 样品溶液的配制

取待测样品制备样品溶液；

S4 液相色谱检测

分别将样品溶液和对照品贮备液进行液相色谱检测，分别得到包括参照物在内的各对照品和样品色谱峰的保留时间，分别计算各对照品色谱峰保留时间与参照物色谱峰保留时间的比值得到对照品的相对保留时间，由对照品相对保留时间确定样品溶液检测色谱峰中各成分的归属，同时读取样品溶液检测结果中各待测成分色谱峰的峰面积以及参照物色谱峰的峰面积；

S5 成分含量的计算

由相对校正因子、样品溶液中各待测成分色谱峰峰面积、参照物贮备液的浓度和样品溶液中参照物色谱峰的峰面积分别计算样品中麻醉椒苦素、二氢麻醉椒苦素、醉椒素、二氢醉椒素、麻醉椒素、去甲氧基醉椒素、卡瓦胡椒素A、黄卡瓦胡椒素B的含量。

2.根据权利要求1所述的一种卡瓦胡椒药材中有效成分定量检测方法，其特征在于，步骤S1和步骤S2中所述溶剂相同，包括甲醇、乙醇或水中的至少一种。

3.根据权利要求2所述的一种卡瓦胡椒药材中有效成分定量检测方法，其特征在于，步骤S1中加入溶剂分别制成浓度约为0.1-1mg/ml的对照品贮备液。

4.根据权利要求1所述的一种卡瓦胡椒药材中有效成分定量检测方法，其特征在于，步骤S2中吸光度值检测的波长与步骤S4中液相色谱检测的波长相同，为232nm。

5.根据权利要求4所述的一种卡瓦胡椒药材中有效成分定量检测方法，其特征在于，步骤S2中分别将各对照品稀释液加入至比色皿中，置于紫分光光度计中，测定各对照品稀释液在232nm处的吸光度值为0.3-0.8。

优选的，步骤S2中对照品的百分吸收系数根据朗伯比耳定律计算得到，具体的计算公式为：

A＝ECL，

所述A为各对照品贮备液的吸光度值，所述C为各对照品贮备液的浓度，所述L为测定的液膜厚度；

所述相对校正因子的计算公式是：

f_s/x＝E_s/E_x，

所述f_s/x是各成分相对校正因子，E_s为参照物的百分吸收系数，E_x为待测成分的百分吸收系数。

6.根据权利要求1所述的一种卡瓦胡椒药材中有效成分定量检测方法，其特征在于，步骤S3具体为：取待测样品精密称量，加入10-50倍量的溶剂经过回流、超声或冷浸处理，过滤得到澄清的样品溶液，所述溶剂包括甲醇、乙醇或水中的至少一种。

7.根据权利要求1或4所述的一种卡瓦胡椒药材中有效成分定量检测方法，其特征在于，步骤S4中所述液相色谱检测的色谱条件是：填料为C18的色谱柱，色谱柱内径为2.1mm，且长度为100mm，填料粒径为1.7μm，洗脱条件为洗脱液A-洗脱液B-洗脱液C，梯度洗脱：0～5min洗脱液A为70～75％，洗脱液B为10％，洗脱液C为20～15％；5～11min洗脱液A为75～65％，洗脱液B为10％，洗脱液C为15～25％；11～15min洗脱液A为65～45％，洗脱液B为10％，洗脱液C为25～45％；15～18min洗脱液A为45～70％，洗脱液B为10％，洗脱液C为45～20％；流速为0.2ml/min；进样量：1μl；柱温：35℃；检测波长232nm；所述洗脱液A为浓度为0.1％乙酸水溶液，所述洗脱液B为乙腈，所述洗脱液C为异丙醇。