[发明专利]一种玉郎伞初代愈伤组织和芽诱导方法

说明书

本发明涉及植物组织培养的方法，具体公开了一种玉郎伞初代愈伤组织和芽诱导方法，旨在解决现有技术叶片愈伤组织诱导过程中外植体褐变的技术问题。本发明的玉郎伞初代愈伤组织和芽诱导方法为对外植体预处理和消毒、外植体茎段诱芽培养、外植体叶片愈伤组织诱导和外植体叶片愈伤组织增殖，所述外植体茎段诱芽培养操作所使用的茎段芽诱导培养基为：MS、1.5mg/L 6‑BA、0.1mg/L NAA、30g/L蔗糖和6g/L琼脂，pH为5.8。本发明提高了玉郎伞叶片诱导愈伤组织的成功率和茎段初步诱导生芽，为下一步的诱芽分化提供材料，促进玉郎伞组织培养快速繁殖体系的建立。

技术领域

本发明涉及植物组织培养的方法，具体地说，涉及一种玉郎伞初代愈伤组织和芽诱导方法。

背景技术

玉郎伞是豆科蝶型花亚科植物疏叶崖豆的块根，又称小牛力、龙眼参、土甘草等，一般生长于山坡、荒地并且阳光充足的地方，主要分布于广西和广东等地。玉郎伞为广西壮、瑶医常用药材，用干燥块根入药，具有抗炎、抗肿瘤、降低血压、扩张血管、保肝及抗自由基、补气、补血、提高机体免疫力等作用，用于治疗小儿疳积、血虚头晕、失眠、骨折、中风性偏瘫等疾病，也可用于治疗高血压、老年健忘、体弱多病及病后、产后虚弱等。见于《广西中药志》、《广西民族药简编》、《湖南药物志》、《广西壮族自治区壮药质量标准(第一卷)》(2008年版)等。随着近年来研究玉郎伞的药用功能逐渐被挖掘，野生玉郎伞资源被利用了很大部分，其次，玉郎伞从人工种植到收获需五年以上，导致出现供求赶不上日渐增长的需要的现象。

目前，玉郎伞的来源主要是人工繁殖和野生资源，人工繁殖主要有块根无性繁殖和种子繁殖，容易受到自然环境的影响目前的繁殖方法存在叶片愈伤组织诱导褐变问题，而且茎段诱导长芽存在的局限性，灵活性不高。其次，据相关报道，目前有关玉郎伞组织繁殖的研究很少。本发明进一步推动玉郎伞的组织快繁进程，满足市场上的需求。

发明内容

本发明的目的在于为克服现有技术的不足，提供一种能克服叶片愈伤组织诱导过程中外植体褐变，提高玉郎伞叶片诱导愈伤组织的成功率和茎段初步诱导生芽的玉郎伞初代愈伤组织和芽诱导方法，为下一步的诱芽分化提供材料，促进玉郎伞组织培养快速繁殖体系的建立。

为实现本发明的目的，本发明提供的技术方案为：

一种玉郎伞初代愈伤组织和芽诱导方法，包括如下步骤：对外植体预处理和消毒、外植体茎段诱芽培养、外植体叶片愈伤组织诱导和外植体叶片愈伤组织增殖；

所述外植体茎段诱芽培养操作所使用的茎段芽诱导培养基为：MS、1.5mg/L 6-BA、0.1mg/L NAA、30g/L蔗糖和6g/L琼脂，pH为5.8。

在上述的玉郎伞初代愈伤组织和芽诱导方法中，所述外植体叶片愈伤组织诱导操作所使用的叶片愈伤组织诱导培养基为：MS、1.0mg/L 2,4-D、1.0mg/L 6-BA、0.1mg/L NAA、30g/L蔗糖和6g/L琼脂，pH为5.8。

在上述的玉郎伞初代愈伤组织和芽诱导方法中，所述的外植体叶片愈伤组织增殖操作所使用的叶片愈伤组织增殖培养基为：MS、0.5mg/L 6-BA、0.2mg/L NAA、0.1mg/L KT、30g/L蔗糖、6g/L琼脂，pH为5.8。

在上述的玉郎伞初代愈伤组织和芽诱导方法中，所述外植体茎段诱芽培养、外植体叶片愈伤组织诱导和外植体叶片愈伤组织增殖的培养条件均为：培养温度控制在(25±2)℃，光照强度为1500-2000lx，光照时间为12h/d。

在上述的玉郎伞初代愈伤组织和芽诱导方法中，所述外植体预处理和消毒的方法是将外植体经过高温高压灭菌，然后依次用酒精、无菌水和汞消毒冲洗。

在上述的玉郎伞初代愈伤组织和芽诱导方法中，所述外植体茎段诱芽培养时将消毒后的外植体茎段去掉顶端和尾部，切割成带两个节点的茎段接种到茎段芽诱导培养基中。