[发明专利]抗体或抗体组合物的制备方法

权利要求书

1.含有至少两个不同Fab区的抗体；或含有至少两种含Fab区的抗体的组合物，所述Fab区在至少两种抗体之间不同；的制备方法，所述方法包括：

i)在表达所述抗体的条件下，培养含有编码所述抗体的核酸的宿主细胞的步骤，和

ii)从宿主细胞培养物回收所述抗体的步骤，

其中，所述核酸编码至少一个含有半胱氨酸残基的区域，所述半胱氨酸残基在所述Fab区的轻链与重链之间形成非天然二硫键，

其中，由于所述非天然二硫键的存在，所述Fab区中的轻链与重链之间的二硫键的位置与至少一个其它Fab区中的轻链与重链之间的二硫键的位置不同，并且其中所述非天然二硫键由在选自以下的至少一组轻链-重链位置引入的半胱氨酸残基形成：轻链116位置-重链134位置、轻链116位置-重链141位置、轻链118位置-重链128位置、轻链121位置-重链126位置、轻链124位置-重链126位置、轻链162位置-重链170位置、轻链162位置-重链171位置，以及轻链162位置-重链173位置。

2.如权利要求1所述的方法，其中，所述非天然二硫键和所述二硫键是CL区与CH1区之间的二硫键，并且，所述抗体的至少一个Fab区的CL区与CH1区之间不形成天然二硫键。

3.抗体的制备方法，所述抗体含有第一Fab区和第二Fab区，其中，所述第一Fab区含有第一轻链和重链，所述第二Fab区含有分别与所述第一轻链和重链不同的第二轻链和重链，所述方法包括：

a)将所述抗体的亲本抗体的第一Fab区的CL区和CH1区中的半胱氨酸以外的至少一个氨基酸残基取代为形成二硫键的半胱氨酸残基的步骤，和

b)通过形成所述二硫键的半胱氨酸残基，在第一Fab区中形成非天然二硫键的步骤，

其中，由于所述非天然二硫键的存在，所述第一Fab区在与所述第二Fab区不同的位置形成二硫键，并且其中所述非天然二硫键由在选自以下的至少一组轻链-重链位置引入的半胱氨酸残基形成：轻链116位置-重链134位置、轻链116位置-重链141位置、轻链118位置-重链128位置、轻链121位置-重链126位置、轻链124位置-重链126位置、轻链162位置-重链170位置、轻链162位置-重链171位置，以及轻链162位置-重链173位置。

4.如权利要求3所述的抗体的制备方法，其中，所述抗体的至少一个Fab区的CL区与CH1区之间不形成天然二硫键。

5.含有至少两个不同Fab区的抗体，其中，至少一个Fab区含有在CL区与CH1区之间形成非天然二硫键的半胱氨酸残基，从而形成非天然二硫键，

其中，由于所述非天然二硫键的存在，所述Fab区中的CL区与CH1区之间的二硫键的位置与至少一个其它Fab区中的CL区与CH1区之间的二硫键的位置不同，并且其中所述非天然二硫键由在选自以下的至少一组轻链-重链位置引入的半胱氨酸残基形成：轻链116位置-重链134位置、轻链116位置-重链141位置、轻链118位置-重链128位置、轻链121位置-重链126位置、轻链124位置-重链126位置、轻链162位置-重链170位置、轻链162位置-重链171位置，以及轻链162位置-重链173位置。

6.如权利要求5所述的抗体，其中，所述抗体的至少一个Fab区的CL区与CH1区之间不形成天然二硫键。

7.如权利要求5所述的抗体，其含有两个不同Fab区。