[发明专利]一株产脂肪酶菌株及其应用

说明书

本发明涉及一株产脂肪酶菌株及其应用，其分类命名为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）CS1802，保藏编号为CCTCC M2018262，该菌株可用于全细胞转化维生素A和棕榈酸生产维生素A棕榈酸酯。本发明的枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）CS1802，来源于传统自然发酵食品，属于公认安全微生物。该菌株易于培养和保藏，通过全细胞转化维生素A和棕榈酸所得维生素A棕榈酸酯含量最高为15.35mg/L。转化效率最高为76.75%。该菌株为酶法合成维生素A棕榈酸酯提供新途径，具有重要应用前景。

技术领域

本发明涉及一株产脂肪酶菌株及其在酶法合成维生素A棕榈酸酯中的应用，属于工业微生物领域技术。

背景技术

维生素A棕榈酸酯是目前最常用的用途最为广泛的维生素A系列产品之一，维生素A棕榈酸酯不但能帮助维持正常视觉功能，还能参与各种代谢活动维持生物机体健康。一般作为添加剂应用于食品、化妆品、医药等行业。目前合成维生素A棕榈酸酯主要有化学法和酶法。化学方法合成维生素A棕榈酸酯存在环境污染、设备腐蚀等问题，而酶法则污染少，时空产率高，成本低。因此维生素A棕榈酸酯酶法合成技术的研究日趋活跃。

枯草芽孢杆菌脂肪酶主要有LipA和LipB，大量研究表明，LipA可以水解长链脂肪酸。Lip A没有盖子结构，并且分子量较小，因此被认为是最小的α/β折叠水解酶之一。通过结构对比发现，Lip A的结构与来源于南极假丝酵母(Candida antarctica)的脂肪酶B很相似，而目前酶法合成维生素A棕榈酸酯的方法大多采用诺维信435(Candida antarcticalipase B)固定化酶，但该酶价格昂贵，工业化生产应用成本太高。麻虾酱主要是由产自海洋的麻线虾加盐自然发酵一月左右制得，富含蛋白质、甲壳素及脂肪，是我国及东南亚地区的常用调味料。麻虾酱微生物多样性和构成非常复杂，适合用作产脂肪酶菌株的筛选。目前未有从麻虾酱中筛选产脂肪酶菌株并利用该菌株开发有机相全细胞转化法生产维生素A棕榈酸酯的报道。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一株产脂肪酶菌株。

为了实现本发明的上述技术目的，本发明采用的技术方案是：

一株产脂肪酶菌株，其分类命名为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)CS1802，保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国.武汉.武汉大学，保藏编号CCTCC M2018262，保藏日期为2018年5月10日。

上述菌株由常熟理工学院发酵工程中心从自然发酵的麻虾酱中分离获得。

本发明的枯草芽孢杆菌CS1802的理化性质如下：

形态学：在筛选培养基上生长1d，能形成明显的菌落。菌落形状不规则或有皱褶，革兰氏阳性菌，杆状。

培养特征：最适生长温度30℃左右，好氧；最适生长pH 7左右。

本发明的另一目的在于提供上述菌株在酶法合成维生素A棕榈酸酯中的应用。

本发明提供了一种利用全细胞转化法产维生素A棕榈酸酯的应用方式，具体包括如下步骤：

(1)将菌株CS1802接种至牛肉膏蛋白胨液体培养基中振荡培养；

(2)将步骤(1)所培养菌株接入发酵培养基中振荡发酵；发酵液进行离心，弃除沉淀，取上清液，即发酵好的菌液。

(3)将发酵好的菌液离心，将菌体接入有机相体系中发酵生产维生素A棕榈酸酯。

进一步的，振荡培养和发酵培养的温度为30℃。

进一步的，发酵培养基成分为：