[发明专利]桑树植原体ltrA基因及其在桑树植原体分子检测中的应用

说明书

本发明公开了桑树植原体ltrA基因及其在桑树植原体分子检测中的应用。本发明首先提供了一种桑树植原体的ltrA基因，该基因可用于桑树植原体的检测。并以ltrA基因为靶基因设计了一组桑树植原体特异性检测引物，进一步构建了桑树植原体检测用试剂盒和检测方法，该方法以及试剂盒的操作简便快速，检测结果准确可靠，特异性强、灵敏度高，检测灵敏度高达1.0×10^‑6ng/μL，能够在桑树植原体引起的相关病害出现明显的病症、病害大爆发前，及时对桑园中桑树植原体引起的相关病害进行监测和控制，为检验检疫工作提供了技术支持，具有非常好的推广应用前景。

技术领域

本发明属于病原分子检测技术领域。更具体地，涉及桑树植原体ltrA基因及其在桑树植原体分子检测中的应用。

背景技术

植原体(Candidatus phytoplasma)在分类上属细菌界(Bacteria)，硬壁菌门(Firmicutes)，柔膜菌纲(Mollicutes)，非固醇菌原体目(Acholeplasmatales)，非固醇菌原体科(Acholeplasmataceae)；对四环素类的抗生素敏感，细胞通常呈圆形或椭圆形，没有细胞壁，在细胞质外具有单层膜，细胞质内有颗粒状的核糖体、可溶性蛋白质、RNA及代谢物等。植原体细胞没有细胞核，基因组是双链闭合环状的DNA，属于革兰氏阳性菌。植原体与1000多种植物病害有关，包括一些重要的园艺作物病害，如葡萄黄化病、草莓黄化病、洋葱黄化病等，其主要症状包括丛枝、黄化、花变叶、花器褪化等，严重时引起植株早衰，直至整株枯死，造成大量经济损失。中国也报道了100多种与植原体相关的植物病害，其中比较重要的有枣疯病、泡桐丛枝病、小麦蓝矮病等。桑树植原体属于翠菊黄化病组(Aster yellowsgroups)B亚组。植原体虽然可以进行体外微量培养，但其培养条件苛刻，人工培养困难，导致植原体至今未能成功的大量分离培养，阻碍了植原体的快速检测研究进展。

目前，桑树植原体引起的相关病害大多通过发病后的病症来判断，分子检测手段应用较少。而随着分子生物学的发展，分子检测技术以其快速、灵敏等优势逐渐成为重要检测手段。现有技术中，刘清神等采用植原体16S-23S rDNA序列而设计的通用引物和巢式引物，建立了快速准确的桑树植原体的巢式PCR检测技术；但是，该巢式PCR检测技术存在检测过程复杂、检测特异性和灵敏性低等缺点，不利于在基层检测单位中推广和使用。因此，亟需进一步研究探索出一种适用范围广、简单、快速和准确的检测桑树植原体的方法。

因此，选择合适的基因区段作为靶基因，建立一种适用范围广、简单、快速准确、特异性的检测桑树植原体的方法，对于监测和控制桑树植原体引起的相关病害具有重要意义。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有桑树植原体检测技术的缺陷和不足，提供一种桑树植原体ltrA基因及其在桑树植原体分子检测中的应用。

本发明能够在桑树植原体引起的相关病害出现明显的病症、病害大爆发前，检测桑树植原体的存在，且在桑树植原体含量极低的情况下也能准确的检测出其存在，进而及时对桑园中桑树植原体引起的相关病害及时监测和控制。具体是以桑树植原体的ltrA基因为靶基因，经过大量的研究和探索，科学的设计出了桑树植原体特异性检测引物，建立了快速检测桑树植原体的方法；该方法的检测结果准确可靠，操作简便快速，检测特异性强、灵敏度高，在桑树植原体引起的相关病害的实际监测和控制中具有广泛的应用价值和重要意义。

本发明的第一个目的是提供一种桑树植原体的ltrA基因。

本发明的第二个目的是提供所述ltrA基因或其片段在桑树植原体分子检测或制备桑树植原体分子检测产品中的应用。

本发明的第三个目的是提供一种桑树植原体特异性检测引物。

本发明的第四个目的是提供一种桑树植原体检测用阳性对照质粒。

本发明的第五个目的是提供一种所述阳性对照质粒的构建用引物。