[发明专利]一种精确检测乳粉中低聚半乳糖含量的方法

说明书

本发明涉及一种精确检测乳粉中低聚半乳糖含量的方法，采用3‑0‑β‑D‑吡喃半乳糖基‑D‑吡喃葡萄糖标准品制备得到标准品溶液，称取低聚半乳糖原料用水溶解后配制成不同浓度的标准曲线溶液，对上述溶液进行离子色谱检测，并利用得到的3‑0‑β‑D‑吡喃半乳糖基‑D‑吡喃葡萄糖标准品色谱峰来定性低聚半乳糖溶液中的低聚半乳糖二糖色谱峰；称取乳粉样品配制成样品溶液，进行离子色谱检测，采用低聚半乳糖原料溶液中已定性的低聚半乳糖二糖作为定量峰，外标法定量，计算样品溶液中低聚半乳糖的含量。本发明解决了现有方法无法准确定性低聚半乳糖并准确测定乳粉中低聚半乳糖含量的问题，具有检出限低、定量准确的优点。

技术领域

本发明涉及分析检测技术领域，具体涉及一种精确检测乳粉中低聚半乳糖含量的方法。

背景技术

低聚半乳糖是具有不同聚合度或同一聚合度但含有多个不同糖苷键异构体的寡糖混合物，分子结构一般是在半乳糖或葡萄糖分子上连接1～7个半乳糖基，即Gal-(Gal)n-Glc/Gal(n＝0-6)。低聚半乳糖是一种具有天然属性的功能性低聚糖，在人体肠道内可被双歧杆菌和乳酸杆菌等益生菌利用，对肠道益生菌有很强的增殖效果，能够促进肠胃蠕动，改善胃肠功能。2008年国家卫生部发布了《关于批准低聚半乳糖等新资源食品的公告》，批准低聚半乳糖作为新资源食品，可广泛应用在婴幼儿食品、乳制品、饮料、烘焙食品和糖果中。该新资源食品用于食品生产加工时，应符合有关法律、法规、标准规定。

鉴于低聚半乳糖组分的复杂性，现有技术无法制备其各个组分的标准品，所以不能完成各个组分的定量检测。目前，国内外的检测方法主要有薄层色谱法、气相色谱法、液相色谱法、离子色谱法等，其中高效液相色谱-示差检测法应用较为普遍，但由于示差检测器灵敏度差，乳粉基质复杂，色谱柱分离效果也并不理想。而离子色谱法检测低聚半乳糖是一种比较新的检测技术，具有灵敏度高、分离度好、分离效率高的优点，在低聚半乳糖检测中得到越来越多的应用。

国外低聚半乳糖离子色谱法有一个AOAC 2001.02《选定食品中反式低聚半乳糖离子色谱法》的检测方法，但是由于该方法的原理使用酶解法，通过酶解前后的差值进行计算，该方法对于乳糖含量高的样品不适合，不适用于乳粉的检测。

公布号为CN 105548436A的专利使用客户提供的低聚半乳糖原料作为标准品并制成标准曲线。称取两份同样质量的样品，一份样品中加入低聚半乳糖原料后再加水溶解，另一份样品直接加水溶解，两份样品进行预处理后得到进样溶液，将标准曲线溶液和样品溶液分别注入离子色谱仪进行检测。根据谱图比对，选择特异峰，使用选择的特异峰进行定量。

该方法因为没有使用低聚半乳糖的标准品，导致其选择的定量峰有很大的主观性，不能准确判断其选择的特异峰就是低聚半乳糖峰。本人在前期实验中发现采用专利CN105548436A现有方法进样低聚半乳糖原料，然后再通过进样蔗果三糖、蔗果四糖和蔗果五糖的标准品和低聚半乳糖原料进行谱图比对发现(见图1)，现有专利方法所选择的保留时间为11.400min、26.534min和保留时间为35.344min的特异峰中分别包含了蔗果三糖、蔗果四糖和蔗果五糖。所以现有专利方法选择的特异峰中不仅包含低聚半乳糖，还包含低聚果糖(低聚果糖包含蔗果三糖、蔗果四糖、蔗果五糖和蔗果六糖)等其他糖类。而由于婴幼儿乳粉中一般都会添加低聚果糖这种功能糖类，所以在使用此专利方法来测定低聚半乳糖含量时选择的特异定量峰是不准确的，导致测得的结果也是不准确的。另外，此专利方法进行低聚半乳糖含量测定时需同时处理两个样品，一个正常处理，一个加标处理，实验步骤较繁琐，工作效率低。

发明内容

本发明的目的在于解决现有技术中存在的上述问题，提出了一种精确检测乳粉中低聚半乳糖含量的方法，使用3-0-β-D-吡喃半乳糖基-D-吡喃葡萄糖作为标准品，定性低聚半乳糖原料中的低聚半乳糖二糖，进而测定乳粉中低聚半乳糖的含量，解决现有方法无法准确定性低聚半乳糖，无法准确测定乳粉中低聚半乳糖含量的问题。此方法具有前处理简单，检出限低，定量准确的优点。

本发明的技术方案是：