[发明专利]一种酶解提取藤壶体内微塑料的方法

权利要求书

1.一种酶解提取藤壶体内微塑料的方法，其特征在于，将藤壶组织加入磁性固定化蛋白酶K的缓冲液中加热酶解，磁铁分离，过滤，得到微塑料提取液，向提取液中加入改性硅藻土，充分搅拌吸附微塑料后过滤；

所述改性硅藻土的制备方法如下：

将硅藻土加入水中，不断搅拌下加入硅烷偶联剂，边搅拌边紫外光照射30min后，过滤，得到改性硅藻土；

所述硅藻土和硅烷偶联剂的质量比为100：（2-5）；所述硅藻土和水的质量体积比为1:（1-3）；

所述磁性固定化蛋白酶K的制备方法如下：

S1.磁性纳米粒子的制备：在氮气氛中将六水氯化铁和四水氯化亚铁，升温到反应温度后滴加氨水，氮气保护下恒温反应2-5h，降至室温，将合成的磁性纳米粒子用去离子水洗涤多次，磁铁分离，待用；

S2.固定化蛋白酶K的制备：将蛋白酶K用无菌水调节成浓缩液，等体积混合后，加入海藻酸钠混合均匀，使得海藻酸钠为5wt%，用注射器吸取混合液，逐滴滴入3.5wt%CaCl₂溶液，制备固定化微球，交联12h之后，用无菌水洗净，研细至10-100nm，备用；

S3.磁性固定化蛋白酶K的制备：将磁性纳米粒子和氨水分别加入到去离子水中，升温至反应温度后滴加硅烷偶联剂，氮气保护恒温反应3-6h，加入固定化蛋白酶K，继续反应2-3h，降至室温，将合成的磁性固定化蛋白酶K用去离子水洗涤多次，磁铁分离，得到磁性固定化蛋白酶K。

2.根据权利要求1所述一种酶解提取藤壶体内微塑料的方法，其特征在于，所述反应温度为50-60℃，所述六水氯化铁和四水氯化亚铁的质量比为1：（2-3）；所述氨水的质量分数为20-24%；所述六水氯化铁和氨水的质量体积比为1：（10-30）；所述磁性纳米粒子、硅烷偶联剂和固定化蛋白酶K的质量比为2:（0.01-0.03）：2；磁性纳米粒子和氨水的质量体积比为1：（10-20）。

3.根据权利要求1所述一种酶解提取藤壶体内微塑料的方法，其特征在于，所述硅烷偶联剂为KH-550，KH-560，KH-570，KH-580，KH-590，KH-902，KH-903，KH-792中的一种或几种混合。

4.根据权利要求1所述一种酶解提取藤壶体内微塑料的方法，其特征在于，所述蛋白酶K的酶活力为1000-2000U/g，步骤S2中所述混合液中蛋白酶K的质量分数为10-20wt%。

5.根据权利要求1所述一种酶解提取藤壶体内微塑料的方法，其特征在于，所述酶解条件为酶解温度50-60℃，酶解时间为4-7h。

6.根据权利要求1所述一种酶解提取藤壶体内微塑料的方法，其特征在于，所述缓冲液含有400mmol/L Tris-Hcl缓冲液，60mmol/L EDTA，105mmol/L NaCl和1wt%的十二烷基硫酸钠，pH值为4-12.5。

7.根据权利要求1所述一种酶解提取藤壶体内微塑料的方法，其特征在于，所述磁性固定化蛋白酶K的缓冲液中磁性固定化蛋白酶K的含量为10-15wt%，所述藤壶组织和磁性固定化蛋白酶K的质量比为1:（0.2-0.5）。

8.一种如权利要求1-7任一项权利要求所述方法制得的微塑料提取液。

9.一种如权利要求1-7任一项权利要求所述方法制得的微塑料提取液用在制备塑料制品中的应用。